文档介绍：膃淀粉酶活性的测定螈一、实验目的莈酶的活力是酶的重要参数,反映的是酶的催化能力,因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征,通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。芅淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。α-淀粉酶是一种典型的内切型淀粉酶,主要作用于淀粉水解的液化阶段,因此又叫液化酶。作为一种最重要的工业酶制剂,α-淀粉酶广泛存在于动物,植物和微生物中。其中,微生物α-淀粉酶以其经济易得成为工业生产主要来源。目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种。羃本实验采用杨氏改良法测定α-淀粉酶;掌握测定α-淀粉酶活性大小与温度关系的方法,通过分析得出酶的最适温度范围。蝿二、实验原理蒆酶促反应中,反应速度达到最大值时的温度和pH值称为某种酶作用时的最适温度和pH值。温度对酶反应的影响是双重的:一方面随着温度的增加,反应速度也增加,直至最大反应速度为止;另一方面随着温度的不断升高,而使酶逐步变性从而使反应速度降低,其变化趋势呈钟形曲线变化。蚅不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度,以及产物的性质等均有差异。α-淀粉酶属水解酶,作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键,迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖,使淀粉的粘度迅速下降,淀粉与碘的反应逐渐消失,这种作用称为液化作用,生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键,因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。蚄本实验通过淀粉遇碘显蓝色,淀粉含量越高,颜色越深。用分管光度计检测显色效应大小,通过分管光度值计算酶活力袁注意:实验中为了消除非酶促反应引起的淀粉水解带来的误差,每组实验都做了相应的对照实验,在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。袈在实验中要严格控制温度及时间,以减小误差。并且在酶的作用过程中,三支测定管及空白管不要混淆。肄三、材料、试剂与仪器莄实验材料:α-淀粉酶蚈仪器:分光光度计、电热恒温水浴锅、小台秤、研钵、玻璃仪器若干羇试剂:.1MHCl:%工作碘液:,定容至1000mL;蚀1%糊化淀粉溶液:,,60℃5min,,定容至100mL;荿稀释α-淀粉酶溶液:待测样品芇四、实验步骤蚁①10mL1%淀粉溶液加入试管中,室温25/45/65℃保温10min螁②于每管中各加酶稀释液1mL,在室温25/45/65℃恒温水浴中(水浴温度的变化不应超过±℃)准确加热10min,冷却。蒇③加1mL1M盐酸终止反应。蚆取上述混合液1mL加入预先装好10mL工作碘液的试管,摇匀。莁660nm测吸光度(蒸馏水调零),记录数据。(注:吸光度测定勿漏空白对照组)薈对照组为不加酶液,加相应体积的水薆五、数据整理及计算肆温度(℃)膁25蚀45羈65蒅OD660袂蚁肇羄对照组OD0660薂根据以上的数据整理的结果,结合以下公式计算两种淀粉酶的活性:酶活=[(D0-D)*100/D0*10]*稀释倍数D—反应混合液吸光度D0—对照组吸光度100—系数(%)10—反应时间酶活定义:1克α-淀粉酶单位相当于在pH5