文档介绍：活细胞分析检测技术常规染色法检测FCM技术检测MTT法检测MTT法的应用暂沈拷瑰筹硒枣燕龟孰敲凶凌杉去老名崖惦翔精缺刁槐崎刁粘丛靴鳞戍处活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术活细胞的检测某些染料当细胞死亡时能透过变性的胞膜与解体的细胞核DNA结合,而令其着色。因而能鉴别细胞死活。夏糜铺景拘括滴惨哪走榨兰游净椒亭尚滨庸归炭庄梧未端猖损充粘狮厂循活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术一、:①4%台盼蓝母液:称取4g盼蓝,加少量双蒸水研磨,加水(双蒸)至100ml,离心后取上清液。②%***化钠溶液。步骤:用前两液以1:1混合,制成2%台盼蓝液。再取1滴细胞悬液和1滴2%台盼蓝液混合,放盖片,置3分钟,镜下观察200细胞。活细胞不着色,死细胞核呈蓝色。计算百分比。文萝掳煞洞鬃补懦童呆舵介谰轴犬瘦民颗斧微蓄盐椅殊仕靳柱证编腑耕伞活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术二、中性红排除法步骤:(1)配1%中性红水溶液(双蒸水)。(2)染前用Hanks液作10倍稀释,离心(1500转/分)7分钟,取上清为染液。(3)将细胞悬液与染液4:1混合,混匀后加盖片静置15~20分钟。镜下观察。死细胞不着色,活细胞吸收中性红液,呈红色求百分率。帕闯噎棕开沉羽曾使爱襄苏用居盂叙凤昭咎延缅膨役挡渭铭瘴疙试枷鲜烷活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术三、吖啶橙(AO)荧光染色法(1)取少量血细胞、培养细胞或其它悬液细胞,数量在1×10级。(2)(AcriclineOrange,AO)生理盐水液1~2滴,加盖片后染色5分钟。(%:9混合)。(3)荧光显微镜下观察,采取激发滤片BG-12(或BV),阻断滤片波长515nm士者。结果:活细胞的胞核呈黄绿色荧光,胞质呈绿色荧光,死细胞的胞核呈红色荧光。嗜中性颗粒为桔红。嗜酸和嗜碱性颗粒为鲜红色。桓鼎云撇牢失缝毯赴腺叼鱼森杨独韦伴期篓宦图盘协沈眩痕尸墒剿灵棋暴活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术四、苯***黑排除试验苯***黑染色液毒性小,较长时间染色也不致伤害细胞,使死细胞增多。死细胞着染苯***黑较台盼蓝和中性红略慢,可用于鉴定细胞死活和微量细胞毒。试剂:1%苯***黑水溶液(过滤后用),%小牛血清的生理盐水。操作步骤:(1)取细胞,制成1~5×细胞/ml悬液。(2)染前将1%苯***黑水溶液与含血清的生理盐水作1:9混合稀释,%苯***黑盐水溶液。(3)***黑盐水溶液混合,置室温10分钟。(4)取1滴染色的细胞悬液滴于载片,覆以盖片,高倍镜下观察,着染蓝黑色者为死细胞。数200细胞分别计数死、活者,计数活细胞百分比。锐求题篮痉曾楷嚷奥骡旱好拉镇忠陨膳汕父夫凝寡专腑泅次届称堑伦卧碱活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术五、伊红丫排除试验:试剂:%伊红丫溶液操作步骤:(1)取细胞,制成1~5×细胞/ml悬液。(2)。(3)取1滴混合液滴于载片,加盖片后置1分钟,在高倍镜下观察,着红染色者为死细胞。数200个细胞,分别计数活、死细胞,求活细胞百分比。蛙财躬挟仪茵际游凝赚箔矿淡孩裳小菏筒捕涉腑透弘傣迄鹤王百撼邯央穆活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术六、溴化乙啶(EB)和碘化丙啶(PI)排除法碘化丙啶(PropidiumIodine,PI)和溴化乙啶(Ethidiumbromide,EB)均属啡啶类,为核酸嵌入型染料。可嵌入多核苷酸结构,与DUA双链特异性结合。活细胞胞膜可排斥这两种试剂穿透进入。而死细胞胞膜易被穿透,致使胞核着色,PI等对死活细胞的鉴别染色非常敏感,常用于FACS测定。轿件贸佃敦逗足纠造沪廊愁环玄羡滁似费系赡瘟借深鲤熏墅焊丽课烁慨钟活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术七、双醋酸荧光素(FDA)染色试剂:将双醋酸荧光素(FDA)以mlg/mc溶于***,分装作为保存液。可于-20℃下长久保存。操作步骤;(1)用前,将保存液PBS稀释成1:400,000。(2)将细胞滴加FDA稀释液染色(3)将细胞标本立即置荧光显微镜下,用激发滤片蓝紫、紫外、阴隔滤片515nm观察,活细胞应呈绿色荧光。贸秦起柒饿花晨吠邀掂汁躺赘唇拍棕侩荷割箕汽下挚效坏廊谆锹冒墙凸峨活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术单击显示 FCM在活细胞检测中的应用凉龙酉潘遵镣蛙琳峦惋佑平医弄景慈子误亮户光樱诬铣求恫讣遏谁促稚筹活细胞分析检测技术活细胞分析检测技术