文档介绍：多头绒泡菌 14-3-3 类似蛋白 cDNA
的克隆及原核表达

(生命科学学院生物技术专业卓水绵)
(学号:2001302073)

摘要:14-3-3 蛋白普遍存在于真核生物细胞中,是由一个基因家族编码的一类蛋白调控
家族蛋白,它几乎参与所有生理反应过程。14-3-3 蛋白作为与磷酸丝氨酸/苏氨酸结合的第一信
号分子,在细胞的信号传导中起着至关重要的作用,其直接参与调节蛋白激酶和蛋白磷酸化酸的
活性,可以与转录因子结合成复合体,调节相关基因的表达[1]。本研究在筛选多头绒泡菌 cDNA
文库中的 SR 蛋白激酶过程中获得的 14-3-3 类似蛋白 cDNA 片段的基础上,通过 PCR 扩增,得到
完整的 14-3-3 蛋白的 cDNA,其全长 1053bp,开放阅读框为 786bp,编码 261 氨基酸,分子量为
30kD,pI 为。该蛋白与其它物种的 14-3-3 蛋白同源性较高,其中与 Dictyostelium discoideum
的 14-3-3 蛋白同源性达到 87%。将其开放阅读框与 pET-28(a+)高效表达载体进行重组,在大
肠杆菌中表达,得到分子量为 30kD 的多头绒泡菌 14-3-3 类似蛋白。
关键词:14-3-3;cDNA 文库;PCR;原核表达
教师点评:卓水绵同学在本科毕业论文研究阶段认真完成了多头绒泡菌 14-3-3 类似蛋白的
克隆及表达,得到了真实可靠的实验结果。该论文的写作比较规范、严谨,是一篇优秀毕业论文。
另外卓水绵同学谦虚、好学、勤奋、表现出良好的创新能力、协作能力和良好的人品。(点
评教师:刘士德副教授)

前言
1967 年 Moore 和 Perez[2]从牛的脑组织中分离出一些酸性的可溶性蛋白,当时人们并不知道
它们的功能,仅仅根据这些蛋白经二乙氨乙基纤维素柱(DEAE-cellulose)后分离组分和淀粉凝胶
电泳后的迁移率等情况将它们命名为 14-3-3 蛋白。在接下来的 20 多年间,大量研究表明 14-3-3
蛋白是动物细胞所特有的、对维持脑神经功能有着独一无二作用的蛋白质[3] 。自 20 世纪 90 年
代,随着克隆技术的发展,14-3-3 蛋白 cDNA 文库的建立,人们对该类蛋白有更进一步的了解,
它们不再被认为是脑组织、动物细胞所特有,在真核生物细胞中都普遍存在,具有高度保守性。
在大多数生物物种中,它们由一个基因家族来编码,即使在植物和动物之间,其同源性也有 70%
以上的相似性。无论是体内还是体外,对 14-3-3 蛋白进行的生化分析及结构分析均表明,14-3-3
蛋白是同源或异源的二聚体分子,分子量为 50-60kD。
14-3-3 蛋白参与细胞许多重要的生理过程,并在其中起着至关重要的作用,如细胞信号的
转导、细胞周期的调控、细胞的凋亡、恶性肿瘤的形成等。例如:哺乳动物的 14-3-3 蛋白可以
与多形瘤病毒中间 T 抗原结合[6],刺激物质向线粒体内的运输[7],调节蛋白激酶 C 的活力[8],刺
激肾上腺嗜铬细胞依赖钙离子的胞吐作用[9],调节 Raf-1 激酶的活性[10],与Cdc25 结合调节细胞
周期[11],与信号分子 Cbl 作用[12