文档介绍：法夫酵母的培养和虾青素的生物合成

(生命科学学院生物技术专业刘贺佳)
(学号:1999302266)

内容提要:法夫酵母( Phaffia rhodozyma)是比较好的虾青素生产菌株,在此实验中,
通过对虾青素摇瓶发酵过程中不同的初始葡萄糖浓度、初始蛋白胨浓度的研究,得出了适宜
的摇瓶培养条件。另外,补加虾青素的前体物如胡萝卜素可提高虾青素的产率,表明前体物
的添加促进了单位细胞虾青素合成。虾青素的分析是通过高效液相色谱进行的。
关键词:法夫酵母、虾青素、β-胡萝卜素
教师点评:刘贺佳同学的毕业论文工作主要包括法夫酵母的培养和虾青素生物合成的研
究。通过对培养的条件的优化得到较高的虾青素产量,同时采用补加前体胡萝卜素的方法进
一步提高了虾青素的生物合成。该同学基础杂实、工作努力,在毕业论文工作中表现优异。
(点评教师:刘刚职称:副教授)
虾青素是一种重要的类胡萝卜素,最初由 Karrert 从龙虾中提取和鉴定。因它在虾壳中
与蛋白质结合而呈现青蓝色,故名虾青素。作为自然界广泛存在的类胡萝卜素之一,虾青素
分布于不同微生物、微藻及动植物之中。它不仅拥有艳丽的红色及极强的色素沉积能力,而
且有很强的抗氧化性、抗肿瘤及增强免疫等特殊的生理功能。近年来国外已进行了广泛研究。
虾青素在食品、医药、化妆品及饲料等工业中具有广阔的应用前景。
法夫酵母生物合成虾青素的研究涉及的内容非常广,本文将主要从以下三方面开展工
作,以期为虾青素的产业化提供有价值的理论指导和基础数据:
(1)法夫酵母菌种生长特性及虾青素合成的研究;(2)虾青素前体物的补加对虾青素
合成的影响;(3)虾青素分离分析。
1 材料与方法
材料
菌种:Phaffia rhodozyma;购自中科院微生物研究所。
培养基
(1)YM 培养基(g/L,pH 值 ):
葡萄糖:10;蛋白胨:5;酵母抽提物:3;麦芽抽提物:3。
(2)斜面培养基(g/L,pH 值 ):
葡萄糖:10;蛋白胨:5;酵母抽提物:3;麦芽抽提物:3;琼脂粉:20。
(3)液体培养基(g/L,pH 值 ):YM 培养基。
(4)转化培养基:YM 培养基的各种成分均减半。
方法
培养方法
(1)菌种活化:从 YM 斜面上取一环至新鲜 YM 平板划线,22℃培养 3 天。
(2)种子扩培:已活化 72 小时的 YM 平板接种一环到 YM 种子瓶中,20℃,160rpmm 培
养 72 小时;最后接种发酵瓶,5%接种量,20℃,160rpmm 培养。
分析方法:虾青素含量的测定采用 DMSO 法及 HPLC 法。
DMSO 法:其工艺如下图所示:
发酵液
离心 3000rpm,10min
1
倒去上清液
菌体
加入 1ml DMSO,静置 5 分钟
菌体 DMSO 悬浮液
离心

下层无色菌体上层红色液
加入 5ml 丙酮
振荡均匀
于λ480nmm 处测 OD 值
虾青素的含量按如下公式计算:虾青素(mg/l)=YA(1000)/2150Z
其中,Y:萃取液