文档介绍：淋洗剂正相液相色谱法的研究
林凯
(理学院应用化学系食品科学专业 1996114219)
一、前言
1、概述
色谱法早在 1903 年由俄国植物学家分离植物色素时采用。它的基本特点是具备两个
相:不动的一相,称为固定相;另一相是携带样品流过固定相的流动体,称为流动相。
它的基本原理是:当流动相中样品混合物经过固定相时,就会与固定相发生作用,由于
各组分在性质和结构上的差异,与固定相相互作用的类型、强弱也有差异,因此在同一
推动力的作用下,不同组分在固定相滞留时间长短不同,从而按先后不同的次序从固定
相中流出。
液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术。高效液相色谱法是在经典液相色谱基
础上,引入了气相色谱的理论,在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏感度检测
器,因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。它可用作液固吸附、液

液分配、离子交换和空间排阻色谱(即凝胶渗透色谱)分析。
以非极性溶剂作流动相,极性物质作固定相的液—液分配色谱适合于分析极性化合
物,这种色谱叫做正相液—液色谱,反之则叫做反相液—液色谱,它适用于分离非极性
化合物。本实验主要应用正相液—液色谱进行分析研究。
高效液相色谱的应用,目前已普及于几乎所有重要的分析学科领域和许多科研生产
部门。根据目前的发展,高效液相色谱能较合理地分离和分析与生物医学有关的大分子
和离子型物质,易变质的天然产物,各种高分子化合物和不稳定化合物,例如蛋白质、
核酸、药物、染料、表面活性剂等。高相液相色谱,特别适用于分离沸点高和热稳定性
差的物质,目已广泛用于化工、食品、医药、生化、卫生、环境保护和高能化合物等生
产和科研工作中。
2、淋洗剂色谱法简介
1992 年,王庆国老师提出了淋洗剂凝胶渗透色谱(E—GPC)方法,E—GPC 的改进
之处表现在淋洗剂的改变。传统的 GPC 用水或有机溶剂作淋洗剂,淋洗剂溶解试样制
备进样试液。而王庆国老师提出的 E—GPC 方法是以一定浓度的溶液代替纯溶剂作淋洗
剂。E—GPC 理论解决了凝胶渗透色谱中有限的峰容量胶束溶液在色谱柱中分离时不断
离解的问题,而且也彻底地解决有限的峰容量问题。
1999 年,游新奎老师将 E—GPC 法的原理用于液相色谱,提出了一种新的液相色谱
法----淋洗剂液相色谱法(E—HPLC)。E—HPLC 法的特征是以对照样品(纯样品溶液或
对比用的纯溶剂)作为淋洗剂,要分析的样品溶液或溶剂作为试样溶液进行分析。其结
果是若分析样品与对比样品完全相同,则不出色谱峰;若有差异,则在相应位置出峰。

其优点在于:
(1)通过观察色谱图有无色谱峰出现,就可以判断样品与对照样品是否相同;
(2)若要对差异进行描述,则可只对有差异的组分进行定量,而不需对样品中的每
个组分进行测量;
(3)可以准确测量各个样品中的细微差异,所以在化学检验方面得到广泛应用。
基于以上的种种优点,这次我们将此淋洗剂理论应用于正相高效液相色谱中,通过
以对照样品(纯样品溶液或对比用的纯溶剂)作为淋洗剂,以浓度相近的样品或溶剂作为
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试样溶液进行正相液相色谱分析,探讨该方法在正相体系中的应用,并且对淋洗剂液相色
谱的柱效进行初步的探讨。
二、实验部分
1、实验仪器与试剂
实验仪器:
高压泵:Waters 公司 515型 HPLC 泵
25µL注射器
色谱柱 Waters公司
Spherisorb S5NH2柱(×150mm)
平均孔径:5μm
检测器:Waters 公司 R401型示差折光检测器
记录仪:Waters 公司 745B 型 Data Module
实验试剂:
正庚烷(n—Heptane) C7H16
分析纯试剂(I 号):
产地:天津市化学试剂一厂
批号:991028
性状:无色透明液体,易挥发,能与醇、醚、三氯甲烷相混溶,不溶于
水,易燃。
分子量:
分析纯试剂(II 号,仅在溶剂质量对比实验中使用):
产地:广州市化学试剂玻璃仪器批发部
批号:960818
三氯甲烷(氯仿)(Trichloromethane):CHCl3
分析纯试剂:
产地:北京化学试剂公司
批号:960712
性状:无色液体,具有特殊臭味,能溶于醇及醚
分子量:
2、实验试液配制:
将分析纯的正庚烷和三氯甲烷按照下表的浓度配成以下五个系列的溶液:
正庚烷溶液 1:1 的正庚烷:氯仿溶