自然水体中细菌VIVIFORM状态及与藻毒素相关性的研究.pdf

文档介绍：自然水体中细菌 VIVIFORM 状态
及与藻毒素相关性的研究

(生命科学学院生物技术李婵)
(学号:1999302220)

内容提要:建立自然水体中细菌的直接计数与平板菌落计数的方法。通过在自然水体中
加入不同浓度的蓝藻毒素,分析蓝藻毒素对细菌形成 VIVIFORM 状态(活的非可培养状态)
的影响,同时初步探讨在西沥水库中影响细菌形成 VIVIFORM 状态的生态因子。
关键词:VIVIFORM 状态、 DAPI 荧光染色直接计数、平板计数、藻毒素
教师点评:本文就自然水体中细菌 VIVIFORM 状态及其与藻毒素的相关性进行了研究。
作者在实验方法的建立和样品采集处理等方面做了深入细致的工作,实验所探讨的问题具有
开创性意义。得到了有创新价值的实验结果。但实验设计和数据采集的完整性方面还有需要
改进的地方。(点评教师:胡章立教授)

1. 引言
细菌 VIVIFORM 状态即“活的非可培养状态”(Viable but Nonculturable State,VNC)
的现象是 1982 年徐怀恕等首次明确提出的。它是不形成孢子的革兰氏阴性菌,在处于连续
胁迫的环境条件下,细胞缩小成球形,用常规方法培养不能生长繁殖,但仍然具有代谢活性
的一种特殊生理状态[2][3]。
随着环境问题的日益严重,各种病原菌随着工业废水大量进入人类赖以生存的自然水资
源。更深层次地揭示这些病原菌如何形成 VIVIFORM 状态及转化为可培养的细胞的途径等
问题直接影响自然水体水质评估与保护等环境问题、疾病预防与控制卫生学问题的理论基
础;更重要的是可利用 VIVIFORM 状态来保存菌种等。
在最近的研究中发现,在蓝藻水华爆发季节,自然水体中水细菌 VIVIFORM 状态细胞的
比率明显增加。蓝藻水华是一个相当复杂的生态学现象,但与非水华爆发期相比较,最重要
的变化之一是蓝藻毒素含量的明显增加。虽然还没有报道表明蓝藻毒素是否促使细菌转化为
VIVIFORM 状态的直接因子,但有研究证明蓝藻毒素可导致细菌膜蛋白和质粒特性的改变。
另一相研究表明:有机药物(如硝基苯、间甲硝基苯酚等)正是通过影响细菌膜蛋白的组成
并导致细菌一些特征质粒的丢失,使细菌转化为 VIVIFORM 状态。在毕业设计的实验中,
人为加入藻毒素,模仿蓝藻水华爆发季节水体中藻毒素大量释放的环境,以研究藻毒素及不
同梯度的藻毒素对细菌 VIVIFORM 状态的影响。

主要材料
西沥水库水样;DAPI(4’6’-diamidino-2-phenylindole)荧光剂 SIGMA;
Standard Plate Count Agar(APHA)培养基 OXOID 公司;藻毒素 MC-LR、MC-RR;
Membrane Filters GTTP ISOPORE 公司;Irgalan Black BGL 200% Ciba 公司;
Cargille immersion 油;一次性使用细菌培养皿、一次性使用无菌注射器、载玻片、盖玻片、
试管、试管塞
方法
取水样
使用 ETM 系列采水器(天津埃特曼)采集水样,并将水样装入有盖的无菌