文档介绍：蚕、蛹主要变应原的分离、鉴定与纯化

(生命科学学院,生物技术系,生物技术专业林格)
(学号:2000302016)

内容提要:蚕、蛹是引起过敏反应性疾病的一种重要过敏原,蚕分桑蚕(家蚕)和山蚕
(野蚕)两大类,前者喂以桑树叶,后者主要以橡树为食物。两种蚕及其所产生的蚕丝都能
引起过敏反应[1-3],而蛹是蚕演变为飞蛾前的过渡形态,通过接触,食用等途径也能引起过
敏反应。目前国内有关蚕、蛹变应原的分离、纯化及免疫学特性研究未见报道。本文采用南
方蚕、蛹作为原材料,通过 Coca、s 提取液提取分别得到蚕不同成长阶段及不同部位,以及
蛹不同部位的粗浸液,通过考马斯亮蓝染色法测蛋白质含量、聚丙烯酰胺凝胶电泳
(SDS-PAGE)分别分离到蚕 19 种蛋白质组分和蛹 17 种蛋白质组分并测定其分子量:采用
Western-blotting 鉴定其主要及次要变应原,发现分子量分别为 82kD,79kD、72kD 及 30kD
的蚕变应原,其中分子量 82kD 是蚕主要变应原;原分子量分别为 82kD, 79kD 及 30kD 的
蛹变应原,分别对蚕主要变应原 82kD 以及蛹特异性变应原 30kD 进行纯化,通过
DEAE-Cellulose DE-52 离子交换层析(Ion Exchange Chromatography 简称 IEC 法)分别对蚕、
蛹变应原进行初步纯化,得到主要及次要变应原的混合组分;再通过 Sephadex S-100 凝胶层
析(Gel Chromatography)对变应原进一步纯化,结果分别分离到蚕具有高活性的分子量为
82kD 及蛹具有高活性的分子量 30kD 的变应原组分。
关键词:蚕:蛹:SDS-PAGE:Western-blotting:离子交换层析: 凝胶层析
教师点评:该论文对蚕、蛹特异性抗原成分进行了分析、鉴定和初步纯化。结果显示蚕
有 19 条蛋白带,其中主带有 7 条:82kD、79kD、35kD、32kD、30kD、28kD 和 24kD,蛹
有 17 条蛋白带,其中主带有 8 条:138kD、82kD、79kD、70kD、41kD、30kD, 29kD 和
27kD,选用蚕、蛹过敏患者阳性血清进行免疫印迹,分别显示蚕 82kD,79kD、72kD 及 30kD,
蛹 82kD, 79kD 及 30kD 抗原条带为阳性条带,经 DE52 离子交换层析对其进行纯化,并对
其免疫学特性进行了初步鉴定。
该论文设计合理、数据可靠,是一篇优秀的本科生论文。点评教师:刘志刚教授

前言
变态反应性疾病被世界卫生组织()认为是当前世界性的重大卫生学问题,世界
各国变态反应性疾病的总发率为 10-30%1、2,过敏性疾病是人类的常见病、多发病,严重影
响患者的健康和生活质量,此类疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎及过敏性眼
结膜炎等,是临床的常见病、多发病。在引起变态反应性疾病众多的变应原中,蚕、蛹变应
原是引起变态反应性疾病的最主要昆虫变应原之一。
蚕、蛹作为昆虫变应原,已被认为是引起 I 型变态反应疾病的重要致敏原之一,尤其
是我国南方地区。蚕、蛹致敏途径主要是通过吸入性过敏及接触性过敏,而我国养蚕地区有
食用蚕蛹的习惯,因此食入性过敏也是我国重要且特有的一种途径 3。其主要临床常见疾病
有:1 呼吸道过敏反应:(1)支气管哮喘:支气管哮喘是吸入变应原后发生的支气管平滑肌痉
挛、气道变应性炎症,出现哮喘、呼吸困难等症状。大多表现为即刻相反应。患者多为特异
性体质者。还有一些人病情严重,且呈慢性,。
该病的早期可能是组胺起主要作用、随后则是白三烯与细胞因子 1L-4 使哮喘持续存在。(2)
变应性鼻炎:当吸入变应原后、患者出现鼻粘膜水肿,分泌增加、流涕、喷嚏等症状。2 皮
肤过敏反应:、红斑或全身性等麻疹等、可在
15— 20 分钟或数小时后消退。如皮肤出现了慢性湿疹。通常是由于肥大细胞释放的细胞因
子及炎症介质作用于血管内皮细胞所致。3 胃肠道过敏反应:主要表现为过敏性胃肠炎。少
数人吃了鱼、虾、蛋等食物、某些药物及被昆虫爬过或含有昆虫分泌物和排泄物的食物 3 后,
可出现荨麻疹、肠蠕动加速致腹痛、腹泻等症状。
蚕、蛹引起的变态反应属于 I 型变态反应,即速发型变应反应,是特异性患者被蚕、蛹
变应原致敏后发生的一系列病理生理过程,I 型过敏反应或称过敏反应是由 IgE 抗体和肥大
细胞/嗜碱性粒细胞及其介质引起的疾病。它是由于致敏机体再次接触相同抗原(变应原)时
1
所