文档介绍：蚯蚓类泛素蛋白的分离纯化与鉴定

(深圳大学,生命科学院生物技术系,生物技术专业何智超)
(学号:2000302052)

内容提要:泛素(Ubiquitin)是能量依赖的蛋白分解途径中重要的组成部分,是一种小
分子蛋白,只有 76 个氨基酸, 存在于所有细胞,泛素具有内在蛋白质分解酶的活性。变性蛋
白质与泛素结合后,被蛋白酶体以 ATP 依赖的方式降解,使人体的内环境保持平衡。本实验
通过使用离子交换和分子筛的方法从蚯蚓体内提取出类泛素,然后再用 SDS-PAGE 和质谱
测定了该蛋白的分子量和做了蛋白质鉴定。
关键词:泛素离子交换分子筛 SDS-PAGE 质谱
教师点评:本课题对蚯蚓提取物做了有意义的提取工作。此工作在国内外都未见报道,
有一定创造性。通过多步层析分离出类泛素蛋白,并利用质谱法鉴定该蛋白与泛素蛋白有高
度同源性。为以后在临床医学上,还是在实验研究上对类泛素蛋白功能的研究打下基础。

前言
蚯蚓作为药物,用于传统中药在我国已有上千年的历史。随着科技的发展,对蚯蚓
的研究也更加深入,而蚯蚓的作用也显得越来越重要。蚯蚓体内含有丰富的蛋白质、氨基酸
及酶类,还有解热碱、嘌呤、胆碱、亚油酸和多种维生素及微量元素。
蚯蚓血纤维蛋白溶解酶(蚓激酶)能相应的预防和治疗一系列由血栓引起的疾病,对保
持人体特别是中老年人的健康起着重要的作用。蚯蚓的溶栓作用是由于蚯蚓提取物中含有大
量具有强烈的直接溶解血栓和人纤维蛋白的活性的纤溶酶组分。现已有蚯蚓纤溶酶粗提物的
口服制剂的商品上市。由于蚯蚓纤溶酶能降低血液粘稠度、改善微循环、并具有良好的体内
外溶栓抗凝作用,在临床上显示对多种血栓疾病有较好疗效而用于治疗中老年脑梗塞和缺血
性脑卒中,并主要侧重于脑血管病的预防及中风后遗症的恢复。张润民等用蚓激酶胶囊治疗
34 例脑梗塞患者,临床总有效率 %,显效率 %。北京宣武医院等多家医院用蚓激
酶胶囊治疗脑梗塞患者 303 例,临床总有效率 %,显效率 %。此外我国率先测定“蚓
激酶”三维结构经过 5 年多的努力,我国科研人员在世界上率先测定了蚓激酶的三维结构,
从而为在分子水平了解这一蛋白药物开启了大门。这不仅为进一步的药物设计奠定了基础,
也使蚓激酶成为我国最早被测定三维结构的蛋白药物之一。另外,蚓激酶中另外一种活性物
质的三维结构也已成功测定。目前,还正致力于其他活性物质的三维结构研究。
抗氧化酶及抗菌肽,蚯蚓特殊的生活环境造成了其体内抗逆性成分含量很高. 蚯蚓体内
超氧化物岐化酶(简称 SOD) 含量甚高。正常情况下,蚯蚓含有低量的抗菌肽,但蚯蚓体内的
抗菌肽是可以被诱导产生的。生物处理(细菌注射) 、物理处理(γ射线和机械损伤) 和化学
处理(重金属和农药污染) 都能诱导产生抗菌肽,蚯蚓在一定的耐受范围内,随着应激强度加
大,抗菌肽活性增强. 一定的物质和方法似乎能诱导出定向的目标抗菌物。可成为今后发明抗
菌药物的一个方向。
蚯蚓的抗肿瘤作用,蚯蚓体内含有多种抗肿瘤成分,Tsunoda 等从蚯蚓中分离出一种胍
类物质,命名为蚯蚓素(D - lombricine) ,并证明其具有抑制小鼠自发性乳瘤生长的作用。蚯蚓