文档介绍：sars病毒论文流感病毒论文:RNA分子抗SARS病毒的应用和研究进展严重急性呼吸综合征(Severeacuterespiratorysyn-drome,SARS)又称传染性非典型肺炎,是一种严重急性呼吸系统传染病,系由SARS相关冠状病毒(Severeacutere-spiratorysyndromeassociatedcoronavirus,SARS-CoV)引起的新发传染病[1]。SARS-CoV是单股正链RNA病毒,呈现典型冠状病毒基因组结构特征:5′-复制酶基因-S基因-E基因-M基因-N基因-3′以及5′和3′端非编码区[2]。SARS-CoV侵入宿主细胞后,首先以病毒基因组RNA为模板,翻译自身RNA依赖的RNA聚合酶,然后利用这种聚合酶完成病毒负链亚基因组RNA转录、各结构蛋白的mRNA转录以及病毒基因组RNA复制等病毒粒增殖过程中的一系列环节[3]。目前SARS治疗的主要策略有广谱抗生素、抗病毒剂和免疫调制疗法,但是很少的药物能够有效的对抗病毒[4],因而对抗SARS治疗而言,改进治疗方案、开发更加特异性的药物和更有效的疗法十分重要。基于核酸的基因调控分子是长度约20个碱基的人工合成性单链或双链DNA或RNA,这些分子包括核酸配体、反义寡核苷酸、核酶和小干扰性RNA,这些分子以序列特异性方式针对细胞或病毒的mRNA,造成靶mRNA断裂和/或阻断靶mRNA的转录与翻译起始,因此成为基因功能分析和抗病毒药物开发的有力工具。本文就这些不同类型RNA分子在抗SARS病毒的应用及机制研究的进展进行综述。1 RNA适配子在抗SARS-CoV中的应用适配子(aptamer)是能与多种目标分子以高亲和力和高特异结合的核酸序列,从原始文库中筛选与配体相对应的适配子的技术称为指数级富集配体系统进化技术,即SELEX(Systematicevolutionofligandsbyexponentialenrich-ment)[5-7]。用于抗病毒的适配子是以病毒基因表达调控有关的蛋白酶和关键基因作为主要靶点,如SARS-CoV的3CL蛋白酶和NTPase/解旋酶,还有双链RNA/DNA解旋、RNA加帽活性中的关键基因均是理想的抗病毒靶点[8]。目前已经利用SELEX技术从多种文库中筛选到能够有效抑制解旋酶活性的适配子。Jang等[9]筛选出针对SARS-CoV的非结构蛋白nsP10的RNA适配子,可以有效抑制解旋酶的活性。然而,天然RNA在体内的稳定性差,极易被体内各种RNA核酸酶降解,故难以在体内应用。Shum等[10]筛选到G-四倍体和非G-四倍体两种构象的适配子。但是仅非G-四倍体能够特异性地抑制病毒解旋酶活性,而G-四倍体却不能。原因在于非G-四倍体经生物素或反向胸腺嘧啶修饰后在血清中的稳定性增强,这种结构性选择及对稳定性的修饰作用为寻找解旋酶适配子提供了新线索。适配子具有靶分子范围广、亲和力和特异性高、稳定性好、制备方便等优点。随着对SARS-CoV感染复制机制的深入研究以及核酸适配体技术的发展,一些有效且低毒的适配体分子被筛选出来,为抗SARS治疗带来了希望,但是核酸适配子易被体内的核酸酶降解,因此它的修饰,转移进细胞等方面也需要进一步研究。2 反义RNA在抗SARS-CoV中的应用反义寡核苷酸(Antisenseoligonucleotide,ASON)指能够以碱基配对方式与特定DNA和RNA结合并阻止它们转录和翻译的短核酸片段(反义链片段)。反义RNA与mR-NA的特异性互补结合可以抑制后者的翻译。最早于大肠杆菌的产肠杆菌素的ColE1质粒中发现通过反义RNA控制mRNA翻译,后来许多实验证明在真核生物中也存在反义RNA[11]。就反义RNA抗病毒方面的研究而言,早在1978年就有报道表明反义寡核苷酸可以抑制劳氏肉瘤病毒的复制[12]。利用反义RNA能与特定的RNA病毒作用,直接抑制这些病毒的复制,从而阻断RNA病毒的繁殖,达到抗病毒性疾病的目的。ASON在抑制SARS-CoV蛋白表达的实际应用中,主要通过化学修饰法来提高ASON的稳定性,体外试验证明硫代修饰的ASON能够下调SARS-CoV结构蛋白E、M、N的表达量[13]。而3′端修饰的ASON能够抑制SARS-CoV突起蛋白(SpikeProtein,SP)的mRNA的表达水平[14]。在抗病毒剂中广泛研究的肽缀合反义吗啉代寡聚体(Peptide-conjugatedantisensemorpholinooligomers,P-PMO)具有更强的反义作用,针对SARS-CoV5′UTR中转录调控序列合成的P-PMO可以减少病毒诱导的细胞病理学并减慢病毒在细胞间的扩散[15]。利用与SARS-CoV种系关系很近的鼠科肝炎病毒(MHV)在体内建立感染模型,显示与M