文档介绍：Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌中的表达及其意义
【摘要】目的:探讨P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、Bcl2、Bax在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义。方法:采用SP免疫组化技术检测59例膀胱移行细胞癌和13例正常膀胱组织标本中Pgp、MRP、Bcl2、Bax的表达。结果:(1)复发膀胱癌组织中Pgp、MRP、Bcl2表达水平高于初发癌组织(P&lt;); Bax表达水平与之相反(P&lt;)。(2)Pgp、Bcl2表达随着病理分级、分期上升而增高,Bax表达随着病理分级、分期上升而下降,MRP与病理分级、分期不相关。(3) Pgp表达与Bcl2呈正相关,与Bax呈负相关。结论:膀胱癌组织Pgp、MRP、Bcl2、Bax可作为判断膀胱癌的恶性度及预后的重要指标。
【关键词】膀胱肿瘤多药耐药 P糖蛋白凋亡
膀胱癌多为移行细胞癌,在手术基础上辅以膀胱灌注已成为膀胱癌的主要治疗方案。术后易复发是其重要的生物学特征。P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白(MRP)作为两种跨膜蛋白都可以介导肿瘤多药耐药(MDR)。本研究采用免疫组化方法检测Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌组织中的表达,并分析Pgp与MRP、Bcl2、Bax的关系。
1 材料与方法
材料
膀胱肿瘤标本59例,来自于本院和江苏省肿瘤医院2004年12月 2006年7月行电切或开放手术患者(年龄36 83岁,男49例,女10例),均经病理学证实为膀胱移行细胞癌(TCC),另取正常膀胱组织13例(经膀胱前列腺摘除术中获得)。膀胱肿瘤患者术后常规行羟基喜树碱膀胱内灌注化疗。肿瘤标本均行HE染色诊断,按WHO病理分级标准,G1 32例,G2 17例,G3 10例;临床分期,T1 34例,T2 15例,T3 4 10例。其中未经化疗的初发肿瘤30例,化疗后复发肿瘤29例。单发性肿瘤42例,多发性肿瘤17例。送检标本用10%中性福尔马林固定24h。
方法
实验方法链霉卵白素(SP)两步法免疫组化技术检测59例膀胱移行细胞癌和13例正常膀胱组织标本中Pgp、MRP、Bcl2、Bax的表达情况。SP试剂盒为美国ZYMED产品。Pgp、MRP、Bcl2、Bax多克隆抗体由北京中杉公司提供。取材后石蜡包埋,常规5μm切片、烤片2h。脱蜡至水、PBS缓冲液浸泡10min,EDTA ,新鲜配置的3%双氧水、封闭用血清孵育10min,加一抗4℃孵育过夜,PBS缓冲液冲洗10min,加二抗孵育15min,PBS缓冲液冲洗10min,滴加链霉卵白素孵育15min,镜下控制DAB显色液,自来水冲洗10min,苏木精染色液复染,乙醇、二甲苯常规脱水、透明,中性树胶盖玻片封片。Pgp、MRP采用肾癌组织,Bcl2、Bax采用前列腺增生组织作阳性对照(阳性对照片由北京中杉公司提供),PBS代替一抗作为阴性对照。
结果判定对不同分组的膀胱癌组织中各蛋白表达情况进行比较时,用阳性表达细胞数量的分值和染色强度的分值两项加权法[1]:连续随机察看10个高倍视野,以定位明确的阳性表达细胞&lt;1%为0分,1% 5%,6% 25%为1