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第卷分析化学研究报告第期
年月~
联苯菊酯酶联免疫吸附分析方法研究
李波施海燕王鸣华
南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室,南京
摘要建立了定量测定联苯菊酯的间接竞争酶联免疫吸附分析方法—。利用联苯菊酯的代谓物
联苯醇合成了联苯菊酯的半抗原一***一一苯基苄基氧基羰基丙酸和一***一一苯基苯甲酸。通
过碳二亚***法将交联于牛血清蛋白作为免疫抗原—,通过活泼酯法将和分别交
联于卵清蛋白作为包被抗原—和—,—为免疫原制备了联苯菊酯的兔抗血清,
间接非竞争酶联免疫吸附分析方法测得其效价达.×。通过同源异源分析,发现异源分析的灵敏度较
高,对值、离子强度、甲醇含量等影响因素进行了研究,./
%的甲醇确定为联苯菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法的最佳工作条件,该方法的为.±.
/,检出限为.±./。对大部分拟除虫菊酯,如三*********菊酯、溴***菊酯、******菊酯、***
戊菊酯、甲***。
关键词联苯菊酯,多克隆抗体,酶联免疫吸附分析
引言
联苯菊酯是拟除虫菊酯类杀虫杀螨剂,具有胃毒和触杀作用,可用于防治农作物害虫、
家庭白蚁、羊毛虫等,是防治茶园害虫的首选药剂¨,持效期较长。目前对联苯菊酯的残留分析主要采
用气相色谱法和高效液相色谱法。这些方法检测费用高,不适合进行批量样品的快速检测。而农
药残留免疫分析技术以其简单、快速、廉价,特别适用大批量样品检测等优点得到了全面迅速发展【。
目前,已有很多拟除虫菊酯酶联免疫吸附分析方法的报道,如***菊酯、******菊酯、甲***菊酯、溴
***菊酯及***戊菊酯。。。水中溶解度低和半抗原合成的难度大是建立拟除虫菊酯酶联免疫方法的主
要问题。本研究以联苯菊酯的代谢物为免疫半抗原,对联苯菊酯进行了酶联免疫方法的研究。
实验部分
. 仪器与试剂.
一旋转蒸发仪瑞士;一多功能搅拌器江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司;
核磁共振仪公司;—液质联用仪公司;型
酶标仪公司;型标洗板机; 核酸/蛋白分析仪公
司;高速冷冻离心机公司;联苯醇、联苯菊酯等原药南京红太阳
集团提供;牛血清蛋白、卵清蛋白,电泳纯,弗氏完全佐剂与弗氏不完全佐剂美国
公司;邻苯二***、辣根酶标记山羊抗兔—/北京博奥森公司;其
它试剂均为分析纯。
. 半抗原的合成
半抗原的合成路线如下反应。
《一㈣“
。
魁醚.
—收稿;—接受
本文系国家.、
项目
—: ..
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第期李波等:联苯菊酯酶联免疫吸附分析方法研究
.. 半抗原.***.,
加入无水吡啶,.丁二酸酐,~避光磁力搅拌反应⋯。反应后的混合液用调节
,用乙酸乙酯进行萃取,取乙酸乙酯层,水洗,无水干燥,浓缩近干。采用柱层析
法纯化,石油醚湿法装柱,分别用***仿、***仿/甲醇:,进行梯度淋洗,浓缩后得到白色晶体。
.. 半抗原.***,加入
.一冠醚,加入***溶解,冷却,在冰浴条件下,,搅拌反
应。将反应后的混合物抽滤,并用少量***洗滤饼,滤饼