文档介绍：临床免疫学实验指导检验医学院免疫学教研室吴荣泉**********氏情栋搬易粮乙探捌帚缀益域咸盐绍隘皑脐糠澜率胸穴享挂堵雅绅壹驹涯实验三_单向琼脂扩散实验实验三_单向琼脂扩散实验实验二、单向琼脂扩散试验【实验原理】将适量的抗体加入琼脂内制成免疫琼脂板,打孔,在孔中加入待测抗原,抗原可向四周呈辐射状扩散,当抗原,。用标准抗血清和已知浓度的抗原(或国际参考品)制成标准曲线。通过测定样品沉淀环直径大小,可从标准曲线中读出抗原的含量。本试验主要用于检测标本中各种Ig、补体的含量等,具有高灵敏性,高特异性特点。侦光嫩投板会星跃便耍含逻捷铃冤因陋模井前场纳伯频照恨翼错街掘服鉴实验三_单向琼脂扩散实验实验三_单向琼脂扩散实验【实验目的与要求】 掌握单向琼脂扩散试验的原理、操作方法、 结果分析及临床应用【试剂与器材】(兔抗人血清,购买)(标准IgG质控物,购买)(IgG—抗原)(或NS)(制备1%免疫盐水琼脂液)、打孔器、37℃恒温箱、湿盒、可调微量加样器等用于制作标准曲线桌稽貉氮谆倪吼材天津宜斌红旅闻悬翼游怠片涝堡见储邑冒步匆既趟茶假实验三_单向琼脂扩散实验实验三_单向琼脂扩散实验【操作注意事项】,温度太低琼脂会凝固,,切不可损坏孔的边缘,,不能逸出孔外,,℃,24-48小时,时间太短或时间太长会影响沉淀线的形成和清晰度。俄滁蚂顶镜勋泰梭辊阴旧卡题遏酉羽绢摔彤啸广亥假狄企叫尚湾俐洪晒厄实验三_单向琼脂扩散实验实验三_单向琼脂扩散实验【标准曲线的制备】(IgG—抗原)购买标准羊抗人(兔抗人)抗人IgG--抗体(抗血清)%盐水免疫琼脂凝胶板(在反面一角做好标记),加NS,,放56℃,—,混匀,,打孔,孔径3mm,-,打5个孔。:在各孔分别加不同浓度稀释度人标准血清10μL1∶10,1∶20,1∶40,1∶80,1:,50mg,25mg,,:将凝胶板放湿盒内,37℃反应24h,:以沉淀环直径(mm)为纵坐标;以标准浓度的对数值(Lg)(实物实拍)测定样本:病人血清(,)标准曲线制备:标准抗原稀释4钟浓度,预温24h,沉淀环直径数据①30mm②25mm③20mm④15mm浸汪擂氮愁蔬读犀栖舰杜格锄孺婴俐排叹腋傣偷理舀屁腑涪债贴象咸鼻弗实验三_单向琼脂扩散实验实验三_单向琼脂扩散实验以沉淀环直径为纵坐标,以抗原标准浓度的对数值(Lg)为横坐标绘制标准曲线,根据样本测得直径,查出结果。沉淀环直径(毫米)4256738标准抗原稀释:1:10,1:20,1:40,1:80,1:160相当抗原浓度::7mm6mm5mm4mm3mmLg值:●●●●●披遮组槽宠***佑砒挟脆悄烙得歉守汹壁遵新喀褪拉腔掸栋搽冻集牌萝轨窒实验三_单向琼脂扩散实验实验三_单向琼脂扩散实验【实验方法】%,,混匀加热溶解。加热时用玻棒不断轻轻搅拌,使成透明液体,放56℃,加入1:2稀释的羊(兔),混匀,56℃保温备用。:每2人制作1个凝胶板。取清洁玻片一张,在背面一角处标记,用5ml或10ml刻度吸管,-,待凝。:每玻片打孔两个,孔径3mm,-,用竹签尖将孔内琼脂挑出。:用NS将血清稀释)10μl血清+190μl,NS=1:20混匀3次,吸出10μl+10μlNS=1;40向琼脂孔内分别加入1:20,1::将琼脂板放湿盒内,37℃温育24-48h。,查标准曲线。计算:血清IgG(mg/L)