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富硒灵芝中高抗氧化活力、高硒含量的水溶性+杜明赵镭陈芳赵广华胡小松硒蛋白,并重点考查了各种试验样品对·和岛一·材料与主要设备实验方法自由基对人体有着很广泛的病理影响,例如导致DNAL12j(HO)(02)2021成的,它的破坏作用受其他种类的自由基和氧化剂的影响很大。同时,由于·的活性最强,所以它的破'4|灵芝具有广泛的药理活性,已被证明具有滋补强身,治疗肝炎、静脉炎、白细胞减少等疾病,防止血栓b7|功能都与灵芝提取液的清除自由基能力有关【灵芝能够从培养基质中吸收%~%的无机硒,并将其中的绝大部分转化为有机硒。而且,约有%的有机硒存在于蛋白质中,硒元素可以显著地提J硒灵芝狦的水溶性蛋白研究表明,它是各种蛋J文中通过对各种柱层析条件的优化选择,从富硒灵芝中分离纯化出一种具有高抗氧化活性的水溶性的清除情况。材料—子实体,由西北农林科技大学秦巴山区研究中心提供。MarkerQ强阴离子交换树脂等,购自尽—QDEAE52树脂和等,购自猂公司。仪器设备涠掣稍锘北京松源华兴科技发展有)UV贤猓杉止夤舛燃上海精密)TGL16GA()ESR(JEOL)BioRad常压生物层析系统,—电泳槽—,超滤装置。℃保存【硒含量和蛋白质含量的测定水溶性硒蛋白溶液经过多次超滤,直到流出液中没有硒元素检出为止,这样测定出来的截流溶液的硒u1|泄┮荡笱称房蒲в胗Qこ萄г海本摘要在富硒灵芝蛋白的各种溶剂提取物中,水溶性蛋白是其中结合硒含量最高的。本文以高硒含量、高自由基清除能力为考查指标,通过优化的柱层析等方法对富硒灵芝中的水溶性硒蛋白进行了提取、分离和纯化。通过电感偶合等离子体发射光谱法—测定蛋白质结合的硒元素含量,采用十二烷基硫酸钠一聚(SDS-PAGE)(EPR)氧自由基的清除能力。研究结果表明,纯化后的硒蛋白显示出很强的羟自由基和超氧自由基的清除能力,并且这种抗氧化能力随着硒蛋白中硒含量的增加而增强,从而反映了硒元素在富硒灵芝蛋白抗氧化活力提高方面的关键词(EPR)重要作用。第一作者:博士研究生怨慊NMㄑ蹲髡。*(NoNCET040134)收稿日期:——猵JV0132
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清除率%匾藿弱┒橹谅况呗塑仿塑用法测定,在清华大学分析实验室完成。蛋白质含量通过ú舛╱最高抗氧化活力的硒蛋白纯化的最佳工艺及参数的确定实验中采用柱层析的方法进行目标硒蛋白纯化。最佳纯化工艺及参数的确定,主要体现在层析填料的选择及最佳纯化参数的确定。在纯化过程中,对每一个蛋白峰进行硒含量和抗氧化活力的跟踪检测。SeGL005撼逡80)12冷冻离心,得上清液。将上清液通过眒孔径的膜,收集滤液作为柱层析样品。纤维素离子交换层析圣宋刂.—撼逡80)滤液溶液梯度洗脱,流速为/韵赐岩航跟踪检测,收集含蛋白部分。Qぷ爸cm)80)mL005—撼逡;撼逡篈,撼逡何;撼逡築,进行%~%ァ和%~的步进式洗脱,流速为Flow(QFF)×(pH80)05上述滤液,以;撼逡篈,缓冲液为缓冲液ァ、%~%B80100B04min80凝胶层析G100(16cm3080)30mL00580)02mLminX280QFFSephadex凝胶层析2334+C2以下,加入缓冲溶液继续超滤,至流