04基因组DNA的分析.ppt

文档介绍：实验四基因组DNA的纯度、浓度及质量分析
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1、实验目的:

结合琼脂糖凝胶技术与紫外分光光度法检测基因组DNA的纯度、浓度,分析抽提质量。

学****使用核酸蛋白定量仪
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2、实验原理:
(1)基因组DNA浓度测定
DNA或RNA在260nm处有最大的吸收峰。因此,可用260nm波长进行分光测定DNA或RNA浓度,OD值为1相当于大约50μg/ml的双链DNA、40μg/ml的单链DNA或RNA、33μg/ml的单链寡核苷酸。如用1cm光径,用H2O或TE稀释DNA样品若干倍并以H2O或TE为空白对照,根据读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度:
DNA含量(ug/ul)=50×OD260读数×稀释倍数/1000
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(2)基因组DNA纯度测定
DNA纯品的OD260/,,因此根据OD260/OD280的比值可估计DNA或RNA的纯度。根据经验,当样品的OD260/-,即认为已达到所要求的纯度。若比值较高说明含有RNA或RNA降解,比值较低说明有残余蛋白质甚至酚等存在,不能准确定量。
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(3)基因组DNA质量分析
基因组DNA的完整性是检测基因组DNA质量的重要指标,利用琼脂糖凝胶电泳,可以检测基因组DNA的完整性。抽提较好的基因组DNA呈现大于10kb的清晰的一条带,如果出现弥散型的条带,说明基因组DNA被破坏。
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