文档介绍：微生物学实验
生命科学实验教学中心510室
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实验三革兰氏染色
实验目的
2. 掌握细菌涂片和革兰氏染色基本程序。
1. 理解革兰氏染色的原理。
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革兰氏细菌的细胞壁结构
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实验原理
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的。
在染色过程中,当用乙醇处理时,肽聚糖脱水而孔障缩小,通
透性降低,使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色,
因此,呈现蓝紫色,用G+表示。
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实验原理
革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低,而易被乙醇溶
解的类脂质含量高。
当用乙醇处理时,类脂质溶解,细胞壁的通透性增加,使
结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色,然后又被染上了复
染液的颜色,因此呈现红色,用G-表示。
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实验器材
(一)金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,土壤分离细菌。
(二)革兰氏染色液:(结晶紫染液;Lugol碘液;95%乙醇;稀释石炭酸复红染液),载玻片,酒精灯,接
种环,吸水纸,香柏油,擦镜纸等。
(三)光学显微镜。
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实验步骤
一、细菌涂片的制作
取干净载玻片一块,在载玻片的左、右各加一滴单蒸水,
按无菌操作法取菌涂片,做成浓菌液。
2. 再取干净载玻片一块将刚制成的浓菌液挑2-3环涂在玻片
两边制成薄的涂面,注意取菌不要太多。
3. 将玻片反复在酒精灯上方通过几次(用手指触摸涂片反面,以不烫手为宜),对标本进行干燥、固定(也可自然干燥)。
待涂片冷却后,再加染色液。
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涂片制作
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