文档介绍：聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作方法
(一)管型盘状电泳
图8 管型盘状电泳槽结构
A为正面 B为剖面
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(3)
 
 
 
电泳槽:盘状电泳槽国内有很多单位生产,也可因地制宜,自己制造,槽大多为圆筒形(图9),也有长方形的,上、下槽分别接铂金丝电极,要注意电极到各胶管的距离相等,以保持各凝胶管的电场一致。
电泳仪:国内生产的型号很多,如北京六一仪器厂的DYY-Ⅲ型,电压在0~600v内任意调节,电流输出0~100mA,这类电泳仪比较恰当。
玻璃管:选择粗细均一的圆玻璃管,内径5~7mm左右,管长70~100mm。管口用金刚砂磨平,电泳管的清洁很重要,需浸入10%重铬酸盐-硫酸溶液中清洗,再用蒸馏水彻底淋洗干净,在管中滴入丙酮而后干燥备用。
聚胶架:普通试管架式样,有机玻璃制成,架的孔洞内装一乳胶管,要求乳胶管孔内径与玻璃管外径相同或略小。
微量注射器或微量进样器:加样时,由于需样品量极小,作定量分析时要求样品量准确,,也可用50或100μl加液器代用。
普通注射器:主要用于灌胶和剥胶,20~30ml,附加10号不锈钢长针头(约10cm长)。
其他:日光台灯,PH计,恒温水浴,烧杯,容量瓶,量筒,试管,漏斗,滤纸,电炉,电子天平等。
(Bis);丙烯酰胺(Acr);四甲基乙二胺(TEMED);过硫酸铵;核黄素(VB2);三羟甲基氨基甲烷(Tris);蔗糖;甘氨酸;盐酸等。
丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺产品不纯时需要纯化后才能使用。
(1)丙烯酰胺纯化法:70g丙烯酰胺溶于500ml氯仿中(50℃),热滤,滤液凉后置-20℃冰箱,即有结晶析出,砂芯漏斗过滤,收集结晶。结晶置于真空干燥器中减压干燥,贮棕色瓶中备用。
(2)甲叉双丙烯酰胺纯化法:12g甲叉双丙烯酰胺溶于100ml 40~50℃丙酮,加热过滤,滤液置-20℃冰箱,结晶析出后过滤,并置于真空干燥器中干燥,保存于棕色瓶中备用。
(1)凝胶及缓冲液配制系统
有关资料很多,可以根据需要选择适宜的系统。列表4供参考。最常用的是系统1(所谓Davis的标准状态)。各种贮存液配制后,盛于棕色瓶中,贮冰箱备用。用时需测PH值,以检查是否失效。TEMED要密封贮藏。过硫酸铵溶液最好现用现配,不宜超过一周。
表4 几种适用电泳的聚丙烯酰胺凝胶系统
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系统Ⅰ
()(%)
系统Ⅱ
()(%)
系统Ⅲ
()(15%)
系统Ⅳ
()(%)
溶液号
组份/100 ml
PH
值
溶液号
组份/100ml
PH值
溶液号
组份/100ml
PH值
溶液号
组份/100ml
PH值
1
1mol/l HCl
Tris
TEMED
15
1mo;/L HCl
Tris
TEMED
17
1mol/L KOH
mlTEMED
20
1mol/l KOH
TEMED
2a
丙烯酰胺
8
2
丙烯酰胺
6
8
丙烯酰胺
 
21
过硫酸铵
 
3
过硫酸铵
 
16
1N H3PO4
Tris
18
过硫酸铵
 
22
1N KOH
4a
1N HCl
 
 
 
19
1N KOH
 
 
 
48ml
Tris
TEMED
TEMED
5
丙烯酰胺
 
 
 
 
 
 
 
 
 
6
核黄素
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
7
蔗糖
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
电极缓冲液:
Tris