文档介绍：免疫实验—抗血清制备及抗体效价检测摘要:用具有抗原性的物质牛血清白蛋白(BSA)注入到健康动物例如鼠、兔的机体后,将引起免疫应答,并会形成浆细胞,分泌抗体。抗体主要存在于血清中,经多次免疫,使血清中的抗体量达到要求浓度,然后采集动物血液,再从血液中分离析出血清,从而获得抗血清。抗血清,是指含有免疫蛋白的血清。抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间,以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。此次实验主要是进行小鼠的牛血清白蛋白(BSA)抗血清的制备过程,并通过酶免疫吸附试验(ELISA)对其进行抗体效价检测。关键字:牛血清白蛋白(BSA)抗血清抗体效价免疫实验过程:本次实验一共分为三个分实验:实验一:免疫实验二:抽血、放血,分离抗血清实验三:ELISA测定抗体效价实验一:免疫一、抗血清制备的原理用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后,将引起免疫应答,并会形成浆细胞,分泌抗体。抗体主要存在于血清中,经多次免疫,使血清中的抗体量达到要求浓度,然后采集动物血液,再从血液中分离析出血清,从而获得抗血清。二、目的制备高效价的抗血清三、实验仪器、材料和试剂实验仪器:1mL注射器,酒精棉球,剪刀材料:家兔,小鼠试剂:3%~5%苦味酸溶液或80%~90%苦味酸,牛血清白蛋白(BSA)三、方法和步骤1、动物编号左前腿上部为1,左腰部为2,左后腿为3,头部为4,背部为5,尾基部为6,右侧从前至后依次为7、8、9。红色表示十位数,用黄色表示个位数。免疫前用金属编号牌固定兔耳,或用染料涂沫在动物的背部,作出明确的标记。2、动物抓取及注射按如下图所示抓取目标动物家兔为300~600μg/次(400),每次不超过2mL;小鼠为10~100μg/次(10-20,20~40μg/ml),。小鼠腹腔注射以左手抓住动物,使腹部向上,右手将注射针头于左(或右)下腹部刺入皮下,使针头向前推 ~,再以45度角穿过腹肌,固定针头,缓缓注入药液,为避免伤及内脏,可使动物处于头低位,使内脏移向上腹。兔子可以分别尝试皮下(脚掌)、皮内、耳静脉、肌肉注射实验二:抽血、放血,分离抗血清一、采血小鼠采血(一)、尾部采血:需血量少时可用此方法。将小鼠放在在有开孔的离心管内,显露尾部,将尾端剪去约5mm,从尾根部向尾端部按摩,血即从断端流出。(二)、小鼠睚眦采血:将毛细管折断,使其断口锋利。采血时,左手拇指和食指抓住鼠两耳之间的皮肤使鼠固定,并用中指配合,轻轻压迫颈部两侧,阻碍静脉回流,使眼球充分外突,提示眼眶后静脉丛充血。用毛细管的断口,右手拇指、食指和中指握住毛细管,将其尖端插入内眼角与眼球之间,轻轻向眼底方向刺入约2~3mm,手指旋转捻动毛细管以刺破静脉丛,,收集鼠血。采血结束后,拔出取血管,放松左手,出血即停止。用本法短期内可重复采血。—,—。家兔的采血(一)、耳静脉抽血:将家兔置于兔固定箱内,对家兔进行耳静脉抽血,此法用于小量抽血,验血测抗体效价,以便决定加强免疫或放血,与耳静脉注射方式相反。(二)、心脏抽血:家兔固定(仰卧)---准确找到心脏部位---剪毛(心脏部位)---消毒---进针(50ml注射器接带硅胶管的12号针头)抽血,抽至50ml,从硅胶管接头处取下注射