文档介绍：杀虫剂离体(invitro)筛选方法研究进展武汉工程大学巨修练*介绍内容一、传统的农药筛选方法二、杀虫剂离体筛选方法三、基因水平的杀虫剂离体筛选方法2019/7/19传统的农药筛选方法杀虫剂主要为活体筛选,明显的不足是虫源一致性差、生长周期长、受外界条件影响大。杀菌剂主要为离体筛选,仍为目前的主要筛选方法。但筛选效率有待于提高。Date除草剂主要为活体筛选,仍为目前的主要筛选方法。但筛选重复性差、周期长、效率低。2019/7/19杀虫剂离体筛选方法传统的离体筛选方法测定化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制;对酪氨酸酶的抑制;对线粒体呼吸酶活性的影响等。,然后进行一定时间的培养后,用MTT发测定细胞存活率。2019/7/19MTT(溴化-[3-(4,5-二***噻唑-2)-2,5-二苯基]四氮唑)法是二十世纪八十年代发展起来的一种快速、简便的体外抗癌药物敏感性的测试方法。目前已被广泛用于杀虫剂离体筛选实验。其作用的基本原理如下:活细胞线粒体中的琥玻酸脱氢酶能够还原黄色的溴化MTT为蓝紫色的不溶于水的甲臜(formazan),甲臜的生成量在通常情况下与活细胞数成正比。由于甲臜的生成量可通过酶标仪测定其在570nm处的吸收度(OD值)而测定,因此可根据OD值推测出活细胞的比例,测定化合物的杀虫活性。—配体结合分析法是一种灵敏,快速,简便,经济的离体生物活性测定方法,研究发现,利用合适的放射性配体作探针,检测受体—配体结合方式及强度,可用于杀虫剂分子的快速筛选。Date配体与受体作用在作用于GABAA受体的杀虫剂筛选中常用的探针有[3H]EBOB(1-(4’-乙炔基苯基)-4-正丙基-2,6,7-三氧杂双环[]辛烷),[3H]IvermectinB1a,,[35S]TBPB(4-叔丁基-双环硫化磷酸酯),作用于烟碱乙酰胆碱受体的[3H]IMI(1-(6-***-3-吡啶***)-N-硝基-咪唑烷-2-亚***),作用于鱼尼汀受体的[3H]Ryanodine等。Date[3H]EBOBDate操作程序如下:抑制率(%)=100×(A-C)/(A-B)A:表示总放射量值(dpm);B:表示非特异性结合放射量值(dpm);C:表示待测样品放射量值(dpm)。Date