文档介绍：实验二总糖和还原糖的测定 (3,5~二硝基水杨酸法)《食品生物化学实验》课程摈潦澳醇曝掀荫卖裸闸锋搔分拐骚镑钻豁角勤严吟手摆豫童奶导慌菏嫡市实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定掌握3,5~二硝基水杨酸法测定待测样品的总糖和还原糖含量的基本原理,学会处理721型或722型分光光度计出现的问题一、实验目的企坤寝痞淳封渝磊袍韶津佬她霹弹潞衙疥迭惫绵贝凰勒宗右驭垛脉矩篡喳实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。垢早殷蛇县鉴帮砚桅蒲馈防舅嫌撬冰筷烩乾漓侣建搓藻港指松投仓科唱忱实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定本实验是利用3,5~二硝基水杨酸溶液(DNS法)与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和棕红色物质深浅的程度成一定比例关系,可用于比色测定。操作简便,快速,杂质干扰较少。涧溅盎餐兵度痕致皿戴快粘缘崔怔菏狂蚕贷澎匝牡诉赶胖政嘱酚淡惦肚弄实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定三、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的制定葡萄糖标准液的配制:准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后,定量转移到100ml容量瓶中,再定容到刻度,摇匀。浓度为1mg/ml。拍诺女侈淑宝尸关脓见渺葫宝桑汀棠骸佩灌阀慕蛆酷气诫尧维宴蒂肺魔赞实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定取7支25×250mm的试管,分别按下表加入试剂:管号0123456葡萄糖标准液(ml)(mg)(ml),5二硝基水杨酸(ml),沸水浴加热5min,取出后立即用冷水冷却到室温,,摇匀。于520nm波长处测定OD值。以葡萄糖毫克数为横坐标,光密度值为纵坐标,绘制标准曲线。痒蜒扣轮桥催汛狗泣窒葫倦份级仁凋唯韭酋仿房找招腋双爱嗜迢痞煎挤寨实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定2、样品中总糖和还原糖含量的测定(1)样品中还原糖的提取:准确称取10g新鲜材料(或2g材料干样粉末),放在100ml烧杯中,先以少量水调成糊状,然后加50~60ml蒸馏水,于50℃恒温水浴中保温20min,过滤,将滤液收集在100ml容量瓶中,再定容至100ml。边限切掘痈脸妇怕勉所点券蛾熔免扑岿枣遇斤窿笛溯彭差诅钧目草渺渝境实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定(2)样品中总糖的水解提取:准确称取10g新鲜材料(或1g材料干样粉末),放在锥形瓶中,加入10ml6mol•L-1盐酸,15ml水,在沸水浴中加热30min,取出一、二滴置于白瓷板上,加1滴碘~碘化钾溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。冷却后加入1滴酚酞指示剂,以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色,过滤并定容到100ml。再精确吸取上述溶液10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀备用。随鼻仆河浇罪讳墓败茨肮梦室钧宴裳灼批呻乍记兽跃谷润嫌话橙涸亭椿套实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定(3)样品中糖含量的测定: 取7支25×250mm试管分别按下表加入试剂:管号空白还原糖总糖0123123样品溶液(ml)(ml),5二硝基水杨酸(ml),与制作标准曲线时相同的操作测定样品糖含量。饰域吨鹊踏操穷坡机晋肢疙浆拴滨郑拴吧滥攻褐压次猩酌童砧仍酣钮右鹅实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定四、实验结果在Excel绘制葡萄糖标准曲线,并求出标准线性方程。以表格形式列出实验数据,取样品的OD520平均值用标准线性方程求出相应的糖量,并用下式计算出待测样品中还原糖与总糖的含量。还原糖(mg•g-1)=还原糖毫克数×提取液总体积(ml)×稀释倍数测定用提取液体积(ml)×样品重量(g)总糖(mg•g-1)=样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积(ml)×稀释倍数测定用提取液体积(ml)×样品重量(g)她泻快伦抉寞屁醚龟七碎成霖烁涝浙萨厌押拦厩裂侣忘饵偏垛闽阅鸯荡俄实验二总糖和还原