文档介绍：:..实验五纤维素酶活力测定(3,5•二硝基水杨酸法)实验六3,5■二硝基水杨酸法测还原糖姓名:周超同组者:刘炳煜班级:11级生命基地学号:201100140067【实验目的】1、学习用3,5■二硝基水杨酸法测定述原糖的方法2、学习川3,5•二硝棊水杨酸法测定纤维素酶活力【实验原理】1、 3,5-二硝基水杨酸法测纤维素齣活力的原理纤维素酶水解纤维素,产生纤维素二糖、葡萄糖等还原糖,能将3,5■二硝基水杨酸中硝基还原成橙色的氨基化合物,利用比色法测定还原物生成虽来表示酶的活力。2、 3,5-二硝垄水杨酸法测还原糖的原理述原糖在碱性条件卜•加热被氧化成糖酸及其他产物,3,5■二硝基水杨酸则被还原成棕红色的3■氨基・5■硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色,在540nm处有最大吸收,在一定的浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利川比色法可以测定样品中还原糖的含量。【实验材料】一、器材比色管、水浴锅、电炉、分光光度计、容量瓶100ml、烧杯、移液枪二、试剂1、标准葡萄糖溶液():准确称取干燥悝重的窗萄糖lOOmg,溶于蒸镭水并定容至100ml,混匀,4°C冰箱中保存备用。2、 3,5■二硝基水杨酸试剂:称取10克3,5•二硝基水杨酸,溶入蒸憎水中,加入20克分析纯氢氧化钠,200克酒石酸钾难,加水500亳升,升温溶解麻,加入重蒸酚3克,。加热搅拌,待全溶后冷却,定容至1000«升。存于棕色瓶中,放置一周后使用。3、 0」-醋酸钠缓冲溶液4、 %竣甲基纤维索钠(CMC)水溶液,溶解后成胶装液,潍置过夜,使用前摇匀。5、西瓜汁6^酶液(l()ug/ml)一、纤维索酶活力测定(3,5・二硝基水杨酸法)1、标准曲线的绘制:,,,0.&•萄糖于6支试管中() ,均川蒸係水稀释至1毫升,加3,5■二硝基水杨酸显色剂3毫升,在沸水浴中煮沸显色10分钟,冷却,加蒸谓水定容至25毫升,摇匀。在550nm处比色,以光密度为纵坐标,以葡萄糖微克数为横坐标,绘制标准1111线。2、样品的测定:空白管(记为A。):取lml酶液与比色管中,沸水浴中溶5min,%CMC,与样品管同时放入水浴锅中5()度保温30niino其他操作同样品管。样品管(记为A],A2,A3):%CMC3ml,酶液lml,在水浴锅中50度保温30min,取出后立即用沸水溶lOmin,冷却。加入3口13,5・二硝基水杨酸显色剂,再沸水浴lOmin,冷却后再加水定容至25ml,混匀,在550nm处比色二、3,5-二硝基水杨酸法测还原糖含量1、标准曲线的绘制:,,,,0.&() ,均用蒸锚水稀释至1毫升,加3,5■二硝基水杨酸显色剂3毫升,在沸水浴中煮沸显色10分钟,冷却,加蒸锚水定容至25毫升,摇匀。在550nm处比色,以光密度为纵坐标,以葡萄糖微克数为横坐标,绘制标准曲线。2、取西瓜汁3ml定容至100ml备用3、取