文档介绍：使用CD115来鉴定和分析小鼠血中单核细胞
12月2日
血中的单核细胞
白血球细胞(leucocyte):粒细胞和非粒细胞
粒细胞(多形核白细胞): 中性粒细胞,嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞
非粒细胞(单核白细胞):淋巴细胞,单核细胞和巨噬细胞
背景介绍
G
Koenderman L et al. J Leukoc Biol 2000;68:58-64
背景介绍
纵向小鼠模型(非致死):
重要性:可用于预测疾病风险的增加,纵向评估病情的进展需求:观察小鼠模型个体在外界刺激或者药物反应中的长期变化困难:每次可采集的小鼠血液样本体积非常小
小鼠单核细胞标记(占血液中细胞总数<3%)
CD11b: 表达在多种细胞表面 (髓样细胞,NK细胞, 活化的T细胞,B细胞)
CD14: 表面表达量低或检测不到
常用
--由此,需要建立有效的实验方案
建立小鼠纵向模型,需要一种流式细胞仪, 可检测超微量血液样品
同时又需保证重复性,数据准确
更加可行的单核细胞标记,用于FACS:
CD115- 细胞表面标记本身具有稳定性,
在检测微量血液样品体积时,测试结果具有一致性
提出的问题及实验的设计
VS
小鼠血样的采集
CD-1 雄性小鼠,
大隐静脉取血(每次采样<%体重,非致死方式)
材料与方法
实验 1: 比较常用的小鼠单核细胞表面标记(Guava easyCyte Mini)
实验 2: 鉴定不同单核细胞表面标记的稳定性
A: 维持的时间长度
B: 不同的激光强度(Guava EasyCyte Mini—20mW; Guava easyCyte 6HT-2L—40mW)
C: 不同的抗凝剂
实验 3: 确定可用于检测的最小血样体积(40ul、20ul、10ul、5ul)
结果 1
比较小鼠单核细胞的表面标记
(CD115 vs CD11b,CD14)
95% CD115阳性细胞: 共表达CD11b+
85% CD115阳性细胞: 共表达CD14+
如以CD115选取细胞群
CD11b及CD14阳性率差异小
50% CD11b阳性细胞:共表达 CD115
70% CD14阳性细胞: 共表达 CD115
如以CD14与CD11b选取细胞群
CD115阳性率差异大
结果 1
比较小鼠单核细胞的表面标记
(CD11b,CD14 vs CD115)
95% CD115+: CD11b+
85% CD115+: CD14
使用CD115+ 设门选取细胞群
观察 CD11b与CD14
CD115所选取的细胞群
亦表现在CD11b及CD14阳性区域
结果 1
比较小鼠单核细胞的表面标记
(CD115 与 CD11b,CD14)
鉴定单核细胞表面标记CD115的稳定性
--A:维持的时间长度
0hr 2hr 4hr
CD115:
33% 降低
CD11b:
% 降低
结果 2
easyCyte Mini: 20mW
easyCyte 6HT-2L:
40mW
更强的激光强度,更高的 gMFI
但信号的降低程度一致(33%)
结果 2
鉴定单核细胞表面标记CD115的稳定性
--B:不同的激光强度