文档介绍：摘要肝中酮体的生成作用是与脂类代谢中脂肪酸分解氧化章节相对应的一个验证性实验,学生能否规范合格的操作和严谨细致的思考,往往影响着实验成效。我们必须仔细透彻地讲解清楚相关理论知识,在实验教学中要求学生处理好每一个操作细节和关键步骤,针对实验结果还可以鼓励学生分析实验方案中的优缺点,提出改进措施。关键词高职;生物化学;实验在药学、药物分析技术和生物制药技术组成的药学专业群中,生物化学是一门重要的专业基础课。而在以就业为导向,以提升学生实践能力为主要目标的高职学校中,如何上好这门专业基础课的实验教学课就显得尤为重要[1]。肝中酮体的生成作用是与脂类代谢中脂肪酸分解氧化章节相对应的一个验证性实验[2],学生能否规范合格的操作和严谨细致的思考,往往影响着实验成效。 1讲清原理,让学生明明白白做实验除了成熟红细胞和脑组织外,几乎所有组织都能氧化利用脂肪酸,通过活化、穿梭、β-氧化生成乙酰辅酶,最终彻底分解为二氧化碳、水和大量能量。而在肝细胞内β-氧化生成的乙酰辅酶则大部分缩合生成乙酰乙酸70、β-羟丁酸30和丙酮含量极少,三者合称酮体。酮体生成酶只存在于肝细胞内,所以本实验就利用组织对比法,将肝匀浆和其他组织匀浆分别与丁酸底物保温,底物和酮体生成酶在适宜的条件下将生成酮体,而酮体能使白色的显色粉转变成紫红色,因此可利用显色反应,对各组合进行对比分析,验证肝为酮体生成器官这一理论。理论上只有既存在底物丁酸,又存在肝匀浆酮体生成酶系的这支试管显色,但是根据多年实践操作,结果并非如此。因为我们不能忽视酮体肝内生酮,肝外利用这一代谢特点,也就是说根据机体状况,各组织器官其实都有可能出现酮体。肝内组织有已经合成但还没有运出去的酮体,肝外组织有还未开始分解利用的酮体。所以为了指导学生对稍后实验结果给出更全面,更科学地分析,讲实验原理时一定会提醒酮体的代谢特点,帮助学生拓展思路。 2规范操作,。本实验选取的是猪肝和猪的肌肉作为组织对比材料。为了提高学生的实验参与度,掌握实验各环节的操作要点,学生需要自己用研钵将两个组织分别研磨直到细胞破碎,释放出胞内酶和其他物质。在教学中强调学生必须养成高度的责任心和严谨的科学态度,如果研磨不彻底,细胞将不能释放出酶,后续实验都无法顺利进行,所以这是实验成功的第一步。 。本实验为定性实验,按下表用滴管分别滴加四支试管即可。在此步骤中学生最容易犯的错误是滴管混用,吸完一种试剂不清洗干净或新换一个滴管,就直接吸取下一种试剂,尤其是吸取肝匀浆和肌匀浆时,这将引起较大显色误差。另外试剂全部滴加完后未认真混匀,也是常见的问题,这将影响酮体的生成量。 。 37度保温后,各管滴加15三氯醋酸20滴用途终止酮体生成酶活性,混匀,静置5备用。同时取白瓷反应板,在4个凹槽中各加入等量显色粉,随后分别用干净吸管从四支试管中,吸取适量试剂滴加于显色粉,最后观察各管的颜色变化。本步骤需注意白瓷反应板各孔的显色粉量尽量一致,并且显色粉中有少量亚硝基铁氰化钠,有一定毒性,需提醒学生提高安全意识,谨慎操作。其次滴加试剂的滴管必须滴一次,洗一次或换一次,以免干扰正确结果。同时滴加的量只要使显色粉湿润即可,而每组自行添加的显色粉量不一定相同,所以需要每一组学生在滴加第一孔显色粉时,做简单摸索,确定需要滴几滴试剂