文档介绍：微生物实验报告微生物的分布实验报告多管发酵法测定水中大肠菌群一、实验目的1、学****测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。二、实验原理水携带的病原菌的存在与肠道来源的细菌相关,肠道病原微生物进入水体,随水流传播可引起肠道病爆发流行,所以必须对水中病原微生物严格监控。但要从水体中直接检出病原微生物比较困难,它们在水中的数量很少且培养条件苛刻,分离和鉴别都比较难,即使样品检测结果是阴性也不能保证没有病原微生物的存在。因此,常用指示微生物作为水体中病原微生物的监测指标。大肠菌群细菌在人的肠道和粪便中数量很多,受到粪便污染的水容易被检出,且检测方法比较简易。所以,常以大肠菌群为微生物评价水的卫生质量。大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24~48h能发酵乳糖产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌,包括埃希菌属(Escherichia)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯菌属(Klebsiella)。大肠菌群数是指每升水中含有的大肠菌群的近似值,根据水中大肠菌群的数目即可判断水源是否被粪便污染,并推断水源受肠道病原菌污染的可能性。本实验主要通过多管发酵法检测水中大肠菌群的数量。多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。发酵管内装有乳糖胆盐发酵液体培养基,并倒置一杜拉姆发酵小管。乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。,37℃下培养,24小时内小套管中有气体形成,并且培养基混浊,颜色改变,说明水中存在大肠菌群,为阳性结果。48小时后仍不产气的为阴性结果。(EMB)培养基平板上划线分离菌落。(本实验只要求做到镜检)以上大肠菌群阳性菌落,经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者,通过此试验再进一步证实。原理与初发酵试验相同,经24小时培养产酸产气的,最后确定为大肠菌群阳性结果。三、实验材料1、培养基及试剂:乳糖胆盐发酵培养基,三倍浓缩乳糖胆盐发酵培养基,伊红美蓝琼脂培养基,灭菌水,革兰氏染液等。2、仪器或其他用具:载玻片,盖玻片,锥形瓶(1个),灭菌吸管(1支),灭菌试管(20支),平皿(12个),无菌枪,试管架,酒精灯,接种针,棉塞等。四、:本实验水样来自辽宁科技大学花坛和人工湖。取距水面10~15cm的深层水样,先将瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出。:本实验使用的培养基是商品培养基。准确配制出120ml的乳糖胆盐发酵液体培养基,10ml的三倍浓缩乳糖胆盐发酵液体培养基,150ml的伊红美蓝琼脂培养基。:取出18支干净的试管,每个试管中倒置一个杜拉姆发酵小管,均加入5ml的乳糖胆盐发酵液体培养基。另取2支试管,倒置杜拉姆发酵小管,各加入5ml的乳糖胆盐发酵液体培养基。将上述的试管,平皿,EMB培养基等实验器具,放入高压蒸汽灭菌锅中,在121℃下,灭菌30min。(内有倒管),以无菌操作各加入已充分混匀的水样10mL。在18支装有已灭菌的5mL乳糖胆盐液体培养液的试管中(内有倒管),以无菌操作加入充分混匀的2种水样的各种稀释梯度1mL,混匀后置于37℃恒温箱内培养48h。:上述各发酵管经培养24h后,将产酸、产气及只产酸的发酵管分别接种于伊红美蓝培养基上,置于37℃恒温箱内培养24h,挑选符合下列特征的菌落:伊红美蓝培养基上:深紫黑色,具有金属光泽的菌落;紫黑色,不带或略带金属光泽的菌落;淡紫红色,中心色较深的菌落。:取上述特征的群落进行革兰氏染色:(1)取上述特征的培养物涂片,涂层要薄;(2)将涂片在火焰上加温固定(不宜过热)(3)待冷却后滴加结晶紫溶液进行初染,1min后用水洗去;(4)用碘液冲去残水,并用碘液覆盖进行媒染,1min后用水洗去;(5)用滤纸吸去玻片上的残水,将玻片倾斜,在白色背景下,用滴管流加95%的乙醇脱色,直止无紫色脱落为止(约20~30s),用水洗去;(6)滴加番红复染2~3min,水洗,晾干、镜检,呈紫色者为革兰氏阳性菌,呈红色者为阴性菌。,再根据初发酵试验的阳性管(瓶)数查表,即得大肠菌群数。五、思考题(1)何谓大肠菌群,它主要包括哪些细菌属?(2)为什么EMB培养基的琼脂平板能够作为检测大肠菌群的鉴别平(3)为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌?服装设计报告书怎么写报告书怎么写服装设计报告书怎么写?