文档介绍：60 Co照射对MGC-803细胞株癌基因表达的影响
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【摘要】[目的] 观察 60 Co照射对胃癌MGC-803细胞株癌基因表达的影响. [方法] 利用常规方法复苏并培养MGC-803胃癌细胞株,利用 60 Co照射癌细胞株,在倒置显微镜下观察细胞形态学变化,利用免疫组织化学及原位杂交方法显示癌基因,观察间隙为6h. [结果] 60 Co照射前MGC-803胃癌细胞株c-fos,c-ha-ras基因表达稳定;照射6h后培养瓶内细胞被破坏或变形,且不表达癌基因,12~24h时部分癌细胞开始表达癌基因,48h时多数癌细胞表达癌基因. [结论] 60 Co照射在癌细胞内作用靶点是癌基因的DNA链,被照射后DNA易被破坏使肿瘤细胞的增生被抑制.
【关键词】基因表达调控,肿瘤;癌基因;放射疗法
放射治疗是重要的肿瘤治疗方法之一,[1] .放射治疗利用各种射线破坏癌基因DNA结构,改变癌基因表达,破坏肿瘤细胞,[2,3] .本文探讨了 60 Co照射对MGC-803胃癌细胞株癌基因表达的影响.
1 材料与方法
材料主要试剂:RPMI-1640培养基为Life Tech公司产品,C-fos抗体为Santa curz公司产品,p53,APC,c-ha-ras生物素标记由北京医科大学病理科提供;MGC-803胃癌细胞株由中国医科大学肿瘤研究所提供.
方法按常规复苏MGC-803胃癌细胞株,细胞贴壁生长,进入对数生长期时参照参考文献[4]方法照射 60 Co放射线,,分别于照射后6,12,24,48h进行观察,:按常规操作,DAB显色,每组设阳性及阴性对照,确定阳性率[5,6] .原位分子杂交:于42
℃条件下用不含探针的杂交缓冲液孵育1,2h,滴加2mg/L含探针的杂交液,覆盖盖玻片,于95℃条件下共变性15min,随即进行反应,42℃过夜(12~16h),清除未结合探针,滴加碱性磷酸酶标记的链霉卵白素,BCIP/NBT显色,设阳性对照,确定阳性率[5,6] .
2 结果
60 Co放射线照射后6h时在倒置显微镜下观察可见,贴壁细胞全部漂浮,细胞被破坏或变形;12h时与6h时相仿,只在少数部位可见漂浮的圆形细胞;24h时可见较多的贴壁细胞;;12h时在细胞内或细胞外可见少量c-fos,c-ha-ras基因表达;24h时表达较12h时增多;,照射后12h时继续分2次给予2000Gy的 60 Co照射,间隔为
5h,到24,48h时观察发现c-fos,c-ha-ras基因表达未增多,提示加大照射剂量或改变照射方法可阻碍癌基因 DNA的表达,抑制癌细胞的增殖.
3 讨论
本实验用免疫组织化学和原位杂交方法观察癌细胞结果示c-fos,c-ha-ras基因呈阳性表达,p53,