文档介绍：利用方法从拟南芥中克隆到睦鶦拟南芥糖基转移酶基因的克隆、载体构建及转基因植物的研制中文摘要庑蚪峁砻髁诵蛄械恼沸浴=龌蛱婊籶械腉糖基转移酶广泛存在于植物中,决定糖苷键的形成,它能将活性糖基从核苷糖,通常是尿嘧啶核苷二磷酸一葡萄糖—转移到激素、次级代谢物、病原菌浸染物以及植物内外源毒性物质等一系列的植物分子上。糖基化往往改变植物分子化合物的生物活性、稳定性、水溶性、运输特性、亚细胞定位以及与受体的相互识别与特异性结合,另外还能降低或者除去内源外源物质的毒性。植物分子的糖基化是一种很普遍的生理现象,是植物细胞维持代谢平衡的主要机制之一。植物分子的糖基化涉及植物激素平衡、植物防御反应、植物脱毒反应、植物的次生代谢以及植物信号转导等多方面功能,对于维持植物的正常生长发育具有重要意义。拟南芥含有众多的糖基转移酶基因,其大部分的功能并不清楚。为了研究这些基因的功能以及开发它们在育种上的应用价值,本论文通过细胞工程和基因工程操作技术,对拟南芥的三个糖基转移酶基因进行了克隆和遗传转化研究,最终获得了它们的转基因拟南芥和转基因烟草。该论文为进一步研究这些基因的功能和应用奠定了基础。论文的主要内容和结果如下。寺×四饽辖娴娜鎏腔R泼富虿⒐菇怂堑闹参锉泶镌靥濉个糖基转移酶基因的全长序列。分别将这三个基因克隆进载体基因,分别构建了它们的植物过表达载体,用于植物的遗传转化。竦昧巳龌虻淖;蚰饽辖婧妥;蜓滩荨利用农杆菌介导的遗传转化法对拟南芥和烟草进行了转基因研究,经过卡那霉素抗性筛选、觳狻甈检测,获得这三个基因的过表达转基因拟南芥纯合体株系。同时,还获得了糖基转移酶基因墓泶镒;蜓滩株系。醪椒治隽颂腔R泼富騏的功能。山东大学硕士学位论文
通过三引物椒ḿ四饽辖鎁基因的迦胪槐浯亢体。通过与野生型拟南芥的比较发现,槐涮宓闹鞲飨员纫吧偷主根短,推测可能是由于该基因的突变影响了植物内源激素的动态平衡。利用海篏进行的生长素分析以及突变体的功能恢复实验正在进行中。ü究翁庋芯浚莆樟讼赴こ逃牖蚬こ滔喙亓煊虻幕±砺塾爰际醴法,例如基因克隆技术、载体构建技术、组织培养技术、植物转基因技术、基因表达分析技术等等,为今后从事于作物的分子设计或基因工程药物开发等相关工作奠定了良好的技术基础。关键词:拟南芥;糖基转移酶;基因克隆;载体构建;转基因植物山东大学硕士学位论文
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⒅参锾腔R泼秆芯拷一刖罱糖基转移酶广泛存在于植物中,决定糖苷键的形成,它能够将活性糖基从核苷糖转移到次级代谢物、激素、植物内外源毒性物质以及病原菌浸染物等一系列植物分子上。糖基供体是核苷二磷酸活化的含糖基化合物,其中咸烟甮钗3<,是植物细胞维持代谢平衡的主要机制之一甒.,V参镄》肿踊衔锏奶腔岣谋淦渖锘性、稳定性、水溶性、运输特性、亚细胞定位以及与受体的相互识别与特异性结合,另外还能降低或者除去内源外源物质的毒性,L腔移酶具有多种功能和生物活性,在植物生长发育等众多方面起着重要作用。糖基转移酶的分类糖基转移酶分为.、.等糖基转移酶,,如玉米可凝性球蛋白家族的玉米黄***和聚***化合物榴菌素,水稻的类黄***新夏佛塔甙、异荭草素等都属于擒栈衔铩L腔R泼富蛞远嗷蚣易宓男问酱嬖谟谥参镏校拟南芥腔R泼钢辽儆个成员,水稻有龀稍保俎V杏个成员.,V拢莸孜锾匾煨院托蛄型葱裕锝绲糖基转移酶己划分成个不同的家族。其中家族包含的成员数量最多,与植物的关系最密切。该家族主要以瓽作为糖基供体,被称为糖基转移酶虺芔凰呋牡孜镏饕J且恍┣字缘男》肿踊衔铮个或多个糖基可以结合在这些分子的.、.、、.或瓹基团上。糖基转移酶的特点植物糖基转移酶家族校行┟冈贑端具有一个由个氨基酸组成的保守序列.,这一保守序列称为盒。其中有两个高度保守的氨基酸,谷氨酸和组氨酸,可通过定点突变这两个氨基酸而使糖基转移酶失活T诩易中具有┒吮J厍拿刚プ笥遥庖槐J匦蛄锌赡茉谔腔山东大学硕士学位论文.,;.,;,.▲
,陋峁琋末端是受体结合区,┒耸腔罨化过程中与尿嘧啶核苷一’磷酸·糖—的结合有关。这些酶的诵蛄斜异较大,与不同底物的识别有关。蛋白质结构信息对研究糖基转移酶的催化机制至关重