文档介绍：免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫学系
实验原理
免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,产生一定大小的复合物,形成光的折射或吸收,测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
免疫比浊法分类
当一束光
线通过溶
液受到光
散射和光
吸收两个
因素的影
响而使光
的强度减
弱
透射比浊法:
在光源的光路方向(00)
测量透射光强度和被检测
溶液微粒浓度关系的方法。
散射比浊法:
在光源的光路方向(50-960)
角的方向上测量透射光强度
和被检测溶液中微粒浓度关
系的方法。
透射比浊法和散射比浊法光路
检测器A
检测器B
IC
I0
Iθ
I
θ
透射比浊法
散射比浊法
(一)基本原理
是个极其简单的方法。在抗原过量情况下,与待测样品中相应的Ig发生抗原-抗体反应,形成可溶性复合物,使反应介质的浊度发生改变。
测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以吸收单位(A)或OD值表示,A值反映了入射光和透射光的比率。待测物中Ig含量可通过标准曲线计算得出。
待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比,而与透射光呈反比。
反应在PEG的作用下,加速复合物的形成。
免疫透射比浊法
透射比浊法测定原理
光源
诱导剂
样品
光电计
滤光片
光源
透射比浊法测定原理
透射比浊法的缺陷:
(1)溶液中存在的抗原-抗体复合物分子应足够大,分子太小则阻挡不了光线的通过。
(2)溶液中的抗原-抗体复合物的数量要足够多。如果数量太小,溶液浊度变化太小,对光通量影响不大。
(3) 透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的,因此只能测定抗原-抗体反应的第二阶段,检测仍需抗原-抗体温育反应时间,检测时间较长。
光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的光能数量
原理
散射比浊法
在入射光的一定角度检测粒子发出的散射光,散射光的强度与IC的含量呈正比。
散射比浊法测定原理
增加散透率: 660nm 测定散射光
聚集形成
诱导剂