文档介绍：CK19 mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及临床意义
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:赵红强王前安泽武郑兴学王鹏陈治齐洪峰梁冲强赵冠
【摘要】目的探讨CK19 mRNA在大肠癌患者外周血的表达及临床意义。方法应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血CK19 mRNA的表达。结果健康人中CK19 mRNA不表达,大肠良性腺瘤疾病患者外周血中CK19 mRNA有1例表达,表达率为5%,大肠癌患者外周血中CK19 mRNA有53例,%,CK19 mRNA表达率与肿瘤分期,瘤细胞的分化程度,肿瘤转移有显著相关性()。结论CK19 mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物具有良好的敏感度和特异性同时CK19 mRNA可作为判断大肠癌患者的预后的指标。
【关键词】大肠癌;外周血;CK19;巢式RT-PCR
细胞角蛋白(CK)来源于上皮组织,是真核细胞的细胞骨架中间丝蛋白,广泛表达于上皮组织细胞中,而在间叶组织中缺乏表达〔1〕。CK19是CK家族的重要成员之一,起源于上皮组织的大肠癌保留着某些上皮组织特异性标记物的表达,而间叶组织中一般无上皮组织标记物表达〔2〕。本研究采用巢式RT-PCR技术检测CK19 mRNA在大肠癌患者外周血中的表达与Dukes分期、肿瘤细胞分化程度、血管生成、微转移和复发之间的关系。
1材料与方法
,入选条件:①术前无放、化疗;②术后病理证实为管状腺癌或乳头状腺癌。健康志愿者20例,大肠良性腺瘤患者20例。
,年龄在35~65岁,中位年龄53岁,手术分期Dukes分期标准,其中A期19例,B期20例,C期40例,D期11例,管状腺癌50例,乳头状腺癌40例,按分化程度分为高分化13例,中分化57例,低分化20例。
,利用Primer Premier ,由北京赛百盛公司合成。
ml新鲜血弃去前2 ml以防抽血过程中上皮细胞污染,留取2 ml于EDTA抗凝管中,红细胞裂解液裂解红细胞,分离有核细胞,采用Trizol试剂(Invitrogen公司)抽提总RNA。样本中加入1 ml Trizol试剂反复吹打使细胞裂解,加入200 μl三氯甲烷剧烈震荡,冰上静置2~5 min,120 000 r/min离心15 min,小心抽取上清放EP管中,加入等体积的预冷异丙醇与-20℃静置20 min,120 000 r/min离心10 min,可见管底有白色沉淀即是RNA,弃去上清加入无核酸酶75%乙醇洗涤RNA沉淀,充分晾干加入DEPC水溶解RNA,所得的RNA溶液用RNase-free DNaseI(Fermentas公司)处理以去除可能存在的DNA基因组污染,-80℃冰箱保存。表13种目的基因的引物序列及产物大小
-PCR扩增使用cDNA合成试剂盒(Fermentas公司)根据所测RNA浓度加入2 μg RN