文档介绍：可溶性Jagged1/Fc融合蛋白对CD4+ CD25+T细胞分化的作用
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
【摘要】目的: 探讨可溶性Jagged1/Fc融合蛋白对小鼠淋巴细胞CD4+ CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)分化的作用。方法:利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)双染技术结合流式细胞术(FCM)观察不同时间Jagged1/Fc融合蛋白及不同浓度Jagged1Notch信号通路抑制剂DAPT对小鼠淋巴细胞表面分子CD4和CD25表达的影响。通过Luminex蛋白液相芯片技术检测Jagged1/Fc作用下T细胞培养上清中白细胞介素4(IL4)、干扰素γ(IFNγ)和转化生长因子β(TGFβ)的表达水平。结果: 浓度为1000 μg/L时, Jagged1/Fc在第1、3、5天均能增强淋巴细胞表面CD4, CD25的表达, 以第3天的增强作用最为明显(); DAPT浓度从2μmol/L逐渐增至16 μmol/L时, 对CD4、CD25表达的抑制作用逐渐增强, 以16 μmol/L DAPT的抑制作用最为明显, 呈剂量依赖关系(, r=), 而Jagged1/Fc能够逆转DAPT对CD4, CD25表达的抑制; Jagged1/Fc能够促进淋巴细胞培养上清中TGFβ表()。结论: 可溶性Jagged1/Fc融合蛋白可能参与诱导小鼠淋巴细胞向CD4+ CD25+ Tr分化。
【关键词】 Jagged1/Fc融合蛋白; 淋巴细胞; 调节性T细胞; 小鼠
Jagged1 (又被命名为CD339)[1]是细胞膜上Notch受体的主要配体之一, 表达于骨髓、胎儿肝基质细胞和胸腺上皮细胞等多种组织, 参与调控许多组织的生长发育。有研究发现, 过表达Jagged1的树突状细胞(dendritic cells, DC)能够诱导CD4+ T 细胞向调节性T细胞1(regulatory T cell 1, Tr1) 、辅助性T细胞3(helper Tcell3, Th3或Th2分化, 从而介导免疫耐受[2-5]。这些结果提示Jagged1在免疫调节中具有重要作用。与以往采用Jagged
1表达载体导入细胞或与固有表达Jagged1的细胞共培养的手段不同, 本研究直接利用可溶性大鼠的Jagged1胞外段与人IgG1 Fc段的融合蛋白, 即Jagged1/Fc融合蛋白来探讨其对CD4+CD25+T细胞的作用。
1 材料和方法
材料
雄性清洁级BALB/c小鼠(8周龄, 体质量18~22 g), 购自广东省医学实验动物中心。L谷氨酰胺、β巯基乙醇、γ分泌酶抑制剂DAPT均购自美国Sigma公司; RPMI1640和胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)为美国Gibco BRL公司产品; Jagged1/Fc 融合蛋白购自RD Systems公司; 白细胞介素2(IL2)购自英国Peprotech公司; 兔来源的antiCD4PE和antiCD25FITC购自美国eBioscience公司; 流式细胞仪(FACSCalibur型)购自美国Becton Dickinson公司。
1.