HPLC测定桂枝汤不同配伍中桂皮酸和桂皮醛的含量.doc

文档介绍：HPLC测定桂枝汤不同配伍中桂皮酸和桂皮醛的含量
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【摘要】建立HPLC法测定桂枝汤中桂皮酸和桂皮醛含量的分析方法,研究配伍对桂枝汤中桂皮酸和桂皮醛含量的影响。[方法]采用L16(215)正交设计,以HPLC法测定桂皮酸和桂皮醛含量。[结果]不同配伍对桂枝汤中桂皮酸、桂皮醛含量有影响。[结论]该方法测定样品成分含量方法准确,敏捷,数据可靠,为药效学提供了科学定量依据。
【关键词】桂枝汤;桂皮酸;桂皮醛;配伍;HPLC法
本研究引入正交设计,合理安排方中甘草、芍药、大枣、生姜与桂枝配伍,采用HPLC法,测定了桂枝与方中其它药物配伍后,其主要成分的含量变化,为进一步研究桂枝汤的含量测定、配伍规律、作用机制等提供参考。
1 药品与材料
仪器
Agilent 1100 Series高效液相色谱仪;METTLER AE240电子分析天平;SB3200超声波清洗器。
试剂

流动相乙腈为色谱纯;水为重蒸馏水;其它试剂均为分析纯。桂皮酸、桂皮醛对照品由昆明海升林科技有限公司提供(批号分别为110786200503,110710200714,供含量测定)。
中药材
桂枝、芍药、甘草、生姜、大枣由宜昌市众生药业有限公司提供(经宜昌市药品检验所魏俊德主任药师鉴定上述药材符合2005年同家药典)。
2 方法与结果
色谱条件
色谱柱为NVCLEOSIL C18(10μm,×250mm),流动相为乙晴%醋酸水溶液(33∶67),检测波长为285nm,柱温为35℃,·min,进样量为10μl[2]。在此条件下,对照品和样品色谱图见图1和图2。

对照品及供试品溶液的制备
对照品溶液的配制
精密称取桂皮酸、桂皮醛对照品适量,分别置于100ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释到刻度,摇匀,放置,滤过,作为贮备液。另取贮备液5ml,加甲醇稀释至100ml,制成每1ml含桂皮酸44μg的对照品溶液。
供试品溶液的制备
按桂枝汤配方比例,精密称取桂枝9g,芍药9g,炙甘草6g, 生姜9g,大枣4枚,加药材5倍水,加热回流2h,四层纱布过滤,精密量取2ml, 置10ml容量瓶中,加甲醇定容至10ml,,得供试品溶液。
标准曲线
精密量取桂皮酸和桂皮醛对照品溶液各2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl,分别注入高效液相色谱仪,以浓度(X)为横坐标,色谱峰面积(Y)为纵坐标,求得回归方程:桂皮酸和Y=+ r=(n=6)、桂皮醛Y=+ r=(n=6)。·ml~531μg/ml、~。
精密度试验
精密量取对照品溶液各10μl,连续进样5次,按上述色谱条件进样测定,所得峰面积分别是桂皮酸:3281、3222、3280、3280、3283,RSD=%(n=5);桂皮醛:4584、4504、