文档介绍：HPLC测定橘叶中橙皮苷的含量
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【摘要】目的:建立高效液相色谱法测定橘叶中橙皮苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为kromasil C18( mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇—醋酸(36%)—水(38∶2∶60),检测波长为283 nm。结果:橙皮苷检测浓度在(~) mg/mL范围内线性关系良好(r= 5),%,RSD=%(n=5)。结论:本方法简便、灵敏、准确,可用于橘叶的质量控制。
【关键词】高效液相色谱法橘叶橙皮苷含量测定
1 实验材料
高效液相色谱仪为SSI-series Ⅳpump泵SSI Model 500-DETECTOR单元液相色谱仪;PC-3000系统检测仪;TL-9000色谱工作站;超声处理器(LC-350A);甲醇为国产色谱纯溶剂,天津市永大化学试剂开发中心出产;乙酸为国产分析纯试剂;水为实验室专用纯水机XYD-10-H处理超纯水;橙皮苷对照品由中国生物制品检验所提供,批号:110721-200512;橘叶8批,由中药材市场购买,均由山西省药品检验所中药室主任和建国鉴定。
2 方法与结果
色谱条件
mm
×250 mm,十八烷基键合硅胶为填充剂,柱温为常温,检测波长为283 nm,以甲醇—醋酸(36%)—水(38∶2∶60)为流动相, μL/min。对照品及样品的液相色谱图见图1。
A. 对照品 B. 样品 1. 橙皮苷
图1 对照品及样品的HPLC图
对照品溶液制备
精密称取橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1 mg橙皮苷的溶液,摇匀,作为对照品溶液备用。
供试品溶液制备
将收集的橘叶研成粗粉,精密称定1 g,置索氏提取器中,加石油醚(60℃~90℃)80 mL,加热回流3 h,弃去石油醚,药渣挥干,加甲醇80 mL,再加热回流至提取液无色,放冷,滤过,滤液置100 mL量瓶中,用少量甲醇分数次洗涤容器,洗液滤入同一量瓶中,加甲醇定容至刻度。
线性关系考察
54 g、 03 g、 04 g、 16 g、 09 g分别置10 mL容量瓶中加甲醇制成每1 mg、 mg、 mg、 mg、 mg橙皮苷的溶液,各取10
μL注入色谱仪中,按色谱条件测得峰面积积分值,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为Y=204 621 152 700X+2 155 ,r= 995,橙皮苷在(~) mg/mL呈良好的线性关系。
精密度试验
( mg/mL)10 μL连续进样6次,测橙皮苷峰面积,结果分别为88 652 906、86 590 036、85 480 256、87 424 068、87 424 661、87 679 805,%。表明仪器进样精密度良好。
稳定性实验