文档介绍：HPLC法测定肾炎四味胶囊中黄芩苷的含量
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【摘要】目的探讨肾炎四味胶囊中黄芩的主要有效成分黄芩苷含量测定方法。方法采用高效液相色谱法:色谱柱:Kromasil C18(150 mm× mm,5 μm);流动相:甲醇-水-磷酸溶液(47∶53∶);流速: mL/min;检测波长:280 nm;柱温:35 ℃。 2~ 0 μg范围内线性关系良好,r= 5;%,%; mg/粒,RSD=%。结论该方法灵敏度高,重复性好,可作为肾炎四味胶囊中黄芩苷的含量测定方法。
【关键词】肾炎四味胶囊;黄芩苷;HPLC法;含量测定
1 实验材料
仪器
高效液相色谱仪(岛津LC-10ATvp,日本岛津公司);N-3000色谱工作站。
试药
甲醇为色谱纯试剂,水为重蒸水,其它试剂均为分析纯;黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号0715-200211);肾炎四味胶囊(湖北午时药业股份公司,批号20060404、20060406、20060408)。
2 方法与结果
色谱条件
色谱柱:Kromasil C18(150 mm
× mm,5 μm);流动相:甲醇-水-磷酸溶液(47∶53∶);检测波长:280 nm;流速: mL/min;柱温:35 ℃。
供试品溶液的制备
取本品装量差异项下的内容物,混匀, g,精密称定,加70%乙醇100 mL,称定质量,超声(功率80 W、40 kHz)处理30 min,放冷,加70%乙醇补足减失的质量,摇匀, μm的膜滤过即得。
空白溶液的制备
取除黄芩外的其余处方量饮片,按制备工艺方法制备缺黄芩的空白样品,按上述供试品溶液制备方法制成缺黄芩的空白溶液。
对照品溶液的制备
mg,置100 mL量瓶中,加70%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取5 mL,置10 mL量瓶中,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1 μg)。
空白干扰试验
分别精密吸取对照品溶液、空白溶液与供试品溶液各10
μL,注入液相色谱仪,测定,得色谱图(见图1)。结果表明,在与黄芩苷对照品色谱峰相同位置上无峰出现,说明缺黄芩空白对照对测定无干扰。
线性关系考察
μg/mL的黄芩苷对照品溶液2、4、6、8、10 mL,分别置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密吸取10 μL进样,测定其峰面积积分值,结果见表1。
以浓度(μg)对峰面积积分值进行线性回归,其回归方程为:
A=×106C-6 540,r= 5。
2~ 0 μg范围内具有良好的线性关系。
精密度试验
精密吸取同一份供试品溶液10 μL,重复进样5次,测定黄芩苷峰面积积分值,分别为1 045 12