文档介绍：P16 基因产物在人类肝细胞癌中的表达及临床意义
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:单铁英董永杰刘晓霞摘要目的:探讨P16蛋白在肝细胞癌中的表达,并推测P16基因在肝细胞癌发生、发展过程中的作用及临床意义。方法:采用免疫组化SP法测定26例肝细胞癌及癌旁肝细胞中P16蛋白表达进行对比研究。结果:26例肝细胞癌P16蛋白表达量明显低于癌旁肝组织。P16蛋白表达量随病理分级增高而降低。部分肝细胞癌组织存在P16蛋白的表达缺失现象。结论:P16蛋白表达障碍可能与肝细胞癌的发生和组织分化有关。可考虑将P16蛋白作为本病预后分析的参考指标值。
关键词肝细胞性肝癌;P16基因;免疫组织化学
肝癌是我国高发的消化道肿瘤之一。它的发生是一个涉及多种癌相关基因协同作用的结果。P16基因是一个抑癌基因,它的作用已受到越来越多的重视。P16抑癌基因由美国Kamb[1]等首先报道,其产物(编码蛋白) 即P16基因蛋白,它参与细胞周期的调节,它的表达异常会导致细胞周期调节紊乱,使细胞过度分裂诱发肿瘤发生[2~5]。本研究用免疫组化链霉素生物素-过氧化酶连接法(SP法)测定肝癌细胞(Hepatocellular Carcinoma,HCC)、癌旁肝细胞中P16基因蛋白的表达状况,并对照分析P16蛋白表达与组织学分级关系, 临床中的地位,发生发展过程中的作用。
1 材料与方法
材料

本实验所选用的26例肝癌组织及相应的癌周组织标本,取自邯郸市中心医院和河北工程学院附属医院普外科2003年2月~2005年11月期间的手术患者,其中男19例,女7例,年龄37岁~70岁,26例病人乙肝表面抗原均呈阳性。所有患者术前均未进行任何化疗或放疗等,Edmondson HCC组织学分级标准,Ⅰ级2例,Ⅱ级15例,Ⅲ级6例,Ⅳ级3例。这些组织在制成切片前均经10%的福尔马林溶液固定后石蜡包埋。
试剂

兔抗人P16单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司,免疫组化SP试剂盒购自ZYMED公司。
方法

石蜡切片4μm,常规脱蜡入水,3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶20min,微波炉热修复抗原10min,10%正常山羊血清(PBS稀释)封闭,室温孵育10min,倾去血清,勿洗,滴加适当比例稀释的P16单抗,4℃过夜,加适当比例稀释的生物素标记的二抗室温30min,滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素室温30min,以上步骤均以PBS缓冲液漂洗,3min/次,DAB显色,苏木素复染胞核,常规脱水透明封片,实验中以PBS代替一抗作阴性对照。光镜下(×400)随机选取10个视野,每个视野计数100个细胞,共计数1 000个细胞,无阳性细胞者为阴性(-),30%细胞着色为阳性(+),30%细胞着色为强阳性()。
统计学分析
,各样本差异的比较采用χ2检验,检验水准=。
2 结果

免疫组化研究结果显示,肝癌组织中P16蛋白的染色大多数为胞浆着色,未见胞核着色。肿瘤细胞胞浆着色大多不均匀,而正常癌旁肝组织着色大多成均匀的棕黄色。结缔组织不着色。

26例肝癌中,P16蛋白阳性9例,其中