文档介绍：p16、cyclinD1在胃癌及癌前病变中表达与胃癌的关系
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【摘要】目的本研究通过检测p16、cyclinD1蛋白在正常胃粘膜、慢性萎缩性胃炎、胃粘膜不典型增生及胃癌中的表达,探讨p16、cyclinD1表达与胃癌发生发展的关系及作用机制。方法应用免疫组化S-P法检测慢性萎缩性胃炎、胃粘膜不典型增生及胃癌组织中p16、cyclinD1蛋白的表达情况。结果①p16蛋白检测结果:p16蛋白在慢性萎缩性胃炎组中阳性表达率(%)显著高于不典型增生组(%)(),不典型增生组与胃癌组(%)之间无显著性差异()。②cyclinD1蛋白检测结果:cyclinD1蛋白在慢性萎缩性胃炎组(%)与不典型增生组(%)之间无显著性差异(),胃癌组中阳性表达率(%)显著高于不典型增生组(%)(),p16与cyclinD1蛋白表达呈负相关系(r=-,)。结论胃癌发生机制涉及p16与cyclinD1基因的异常,随着病变进展,p16蛋白表达逐渐降低,cyclinD1蛋白表达逐渐升高,提示p16、cyclinD1可能是胃癌发生过程中的早期分子事件。
【关键词】胃癌免疫组 p16;cyclinD1
胃癌是常见的恶性肿瘤之一,其病因及发病机制还未完全阐明。因此,深入探讨胃癌的发生发展规律,对揭示胃癌的发生机制具有重要意义。本研究利用免疫组织化学方法,对胃癌及癌前病变中p16、cyclinD1基因的表达产物进行分析研究,对揭示胃癌的发生、发展提供理论依据,为临床诊断和治疗提供参考。
1 材料与方法
标本来源收集河北省邯邢矿山管理局职工总医院病理科2000年2月~2005年8月存档胃镜咬检的石蜡包埋胃粘膜组织50例(慢性萎缩性胃炎24例,不典型增生26例)及胃癌标本36例,均有完整的病理资料。所有标本常规石蜡包埋制成4μm厚切片4张,其中一张切片HE染色进行病理形态学观察,其余3张切片用于免疫组织化学染色。
主要试剂鼠抗人细胞周期素D1单克隆抗体(ZM-0084;克隆系:DCS-6);鼠抗人p16单克隆抗体(ZM-0205;克隆系:16P07);S-P试剂盒(sp-9000),DAB显色剂,为美国Santa Cruz公司产品,均购自北京中山生物技术有限公司。
免疫组织化学染色方法主要步骤福尔马林固定、石蜡包埋的病理组织块切成4μm厚切片,每个蜡块各作4张切片。第一张用于HE染色,%PBS代替一抗作为阴性对照,第三、四张分别行抗p16、cyclinD1抗体标记p16、cyclinD1蛋白,免疫组织化学染色用链菌素亲生物素-过氧化物酶(S-P)法。
判断标准 p16参照Geradts[1] 标准,细胞核或细胞浆着棕黄色为阳性细胞。阴性(-)表示未见阳性着色细胞,或仅有胞浆着色而每高倍镜下胞核着色细胞个数≤1;弱阳性(+)表示着色较浅或着色细胞数≤25%者;阳性(++)表示着色深度适中或着色细胞数占25%~50%者;强阳性(+++)表示着色较深或着色细胞数50%者;所有阳性样本必需满足每高倍镜下核着色细胞个数