文档介绍：PCNA,Bcl2和Bax在翼状胬肉中的表达及其意义
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:颜美荣,李正贤,刘庚勋,周一鸣,彭昌福,王芳
【摘要】目的 A,Bcl2和Bax的表达水平,A,Bcl2和Bax在翼状胬肉发病中的作用。方法采用免疫组化Elivision法检测20例翼状胬肉、A,Bcl2和Bax表达水平。结果 A,Bcl2和Bax的阳性表达率分别为95%(19/20),95%(19/20)和80%(16/20),A,Bcl2和Bax的阳性表达率分别为60%(6/10),20%(2/10)和60%(6/10)。PCNA和Bcl2阳性表达两组间差异有显著意义(),而Bax阳性表达两组间差异无显著意义()。结论 A的高表达和Bcl2与Bax表达失衡有关,可能是细胞异常增殖和凋亡失衡的共同结果。
【关键词】 PCNA;Bcl2;Bax;翼状胬肉;凋亡;免疫组织化学
翼状胬肉的发生,与紫外线照射及烟尘刺激有关,不仅影响外观,还可能损害视功能,其发病机制目前仍不十分清楚,近年来的研究发现,翼状胬肉是一组织增生性疾病,可能与细胞异常增殖和凋亡有关[1~2],我们应用免疫组织化学Elivision法检测翼状胬肉组织中凋亡相关基因Bcl
2,A的表达,旨在探讨PCAN,Bcl2和bax基因产物在翼状胬肉发病机制中的作用。为翼状胬肉的化学药物治疗和基因治疗提供新依据。
1 材料和方法
一般资料
选择本院2004—2005年门诊及住院的20例翼状胬肉患者的手术标本。其中男11例,女9例,年龄39~64岁,病程15个月~12年;对照组为同期手术的10例正常结膜组织,年龄35~62岁,所有病例均无其他角膜、结膜疾患。标本经10%甲醛固定,常规脱水、石蜡包埋。
方法
标本经固定后,常规脱水石蜡包埋,作3 μm 连续切片,分别进行HE染色和免疫组织化学染色。切片脱蜡至水化,3%过氧化氢孵育10 min ,消除内源性过氧化物酶活性,蒸馏水冲洗,PBS浸泡3×2 min,微波炉抗原修复(95~98 ℃),自然冷却至室温,加入即用型Bcl2,bax和1:A单克隆抗体,37 ℃孵育30 min,或4 ℃过夜,用普通小鼠IgG及PBS代替一抗作阴性及空白对照,PBS冲洗3
×2 min,滴加增强剂(A),37 ℃孵育30 min,PBS冲洗3×2 min,滴加生物素聚合物(B),37 ℃孵育30 min,PBS 冲洗3×2 min。二氨基联苯胺显色,苏木素复染,中性树胶封片,显微镜观察照相。
染色结果判断
阳性细胞为呈棕黄色颗粒的阳性反应产物。每张切片在高倍显微镜下(200倍)随机选择5个视野,计算每个视野阳性细胞率,取平均值作为该标本的阳性细胞率。表达结果分为阴性(-):无阳性细胞;弱阳性(+):阳性细胞率50%;强阳性(++):切片中阳性细胞率50%。
统计学方法
结果应用χ2检验进行统计学分析。,。A,Bcl2和Bax在翼状胬肉中的表达及其意义颜美荣,等
2 结果
Bcl2,A在翼状胬肉及正常结膜中的表达,由表