文档介绍：山东医药年第璺笙
· 基础研究·
骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血
损伤的治疗作用
张向群。王新平。张文治。。路蔚。
天津市泰达医院,天津;天津市环湖医院;天津医科大学第二附属医院
摘要】分离和培养大鼠骨髓问充质干细胞,并用线拴法制作大脑中动脉闭塞模型,将大鼠
随机分为立体定向移植组、尾静脉移植组及模型组,其中移植组中又包括预诱导和未诱导。移植组在造模
天后分别经立体定向和尾静脉途径将植入大鼠脑内,比较不同移植时间的神经功能缺损
评分以及免疫组化染色的差异。结果移植后各组评分无统计学差异;在周及、、个月时各移植组
评分均低于对照组;、个月时立体定向移植组的评分低于尾静脉组;个月时预诱导组低于未诱导
组;免疫组化结果显示立体定向组在梗死侧半球有大量阳性细胞,尾静脉组双侧半球均可见少量阳性细
胞。移植后个月可见分化为、免疫组化双阳性细胞。认为可以在体外分离、
培养和传代,以立体定向和尾静脉两种途径移植的可在宿主脑内存活和分化,并改善神经功能;立体定向途
径移植效果优于尾静脉途径。
关键词骨髓祖代细胞;造血干细胞移植;脑缺血
中图分类号. 文献标识码文章编号
干细胞移植是近年来医学领域的研究热点,骨代的加入内含、%
髓间充质干细胞存在于骨髓问充质中,具有、青链霉素预诱导,上流式细胞仪检测,显
多项分化潜能,临床应用前景良好。年月~ 示∞阳性率%、弘阳性率.%、。阳性率
年月,我们通过观察不同途径移植对.%,说明分离培养所获得的纯度高。
大鼠脑缺血再灌注损伤的治疗效果,探讨其用于治.. 模型制作与分组用改良线栓
疗缺血性脑血管病的可行性及其治疗机制。法阻断左侧大脑中动脉制作大脑中动脉闭塞
材料与方法局灶性脑缺血模型,后拔线栓再灌注。
. 动物、仪器与试剂健康成年雄性大鼠以提尾时大鼠右前肢屈曲、内收或行走时向右侧转
只,体质量分别为—用于分离和培养圈或倾倒为造模成功。造模成功后第天,将模型
和—用于造模,由中国军事医学大鼠分成组例、组例、对照组例,组
科学院动物中心提供。一溴尿嘧啶核昔, 通过立体定向仪定位大鼠左侧纹状体,注射×。
公司;鼠抗人尿嘧啶脱氧核昔个标记的下设组和组各例,
单克隆抗体、兔抗人神经元特异性烯醇化酶分别注射预诱导和未诱导的;组通过尾静
多克隆抗体中杉公司、兔抗人胶质纤维酸脉注射标记的下设组和组,分
性蛋白多克隆抗体中杉公司,大鼠立体别注射预诱导和未诱导的;对照组不接种。
定向仪、切片机、图像采集显微镜。.. 神经功能缺损评分标准量表
. 方法包括项,总分分,完全正常:分,完全功能
.. 的分离、培养及诱导断颈法处死大缺失分。每只动物观察两次计算平均数。大
鼠,取股骨及胫骨,用标准培养液冲洗骨髓腔, 部分存活鼠梗死后功能评分~分。
冲洗液离心,弃上清,.. 脑组织石蜡切片制备及免疫组化染色于
离液上层,取单个核细胞层,以。/接种到培不同时间点取大鼠处死,用%多聚甲醛磷酸盐缓
养瓶中,隔全量换液。待原代细胞生长至瓶底的冲液灌注固定,取脑后置于固定液中以上。常
% ~%时,用胰蛋白酶液和液消化,离心规石蜡切片,行染色及免疫组化染色。
后加人标准培养液,以:比例传代。传代