文档介绍：RPHPLC法测定六味地黄汤生物制剂中丹皮酚的含量
【摘要】目的建立测定六味地黄汤生物制剂中丹皮酚含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法:色谱柱为UltimateTMAQC18色谱柱( mm×250 mm,5 μm),以甲醇水(体积比45∶55)为流动相,流速1 mL/min,柱温 30 ℃,检测波长274 nm。~ μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r= 0,n=5),%,%。结论该方法准确、专属性强、重复性好,可用于测定六味地黄汤生物制剂中丹皮酚的含量。
【关键词】光合细菌六味地黄汤丹皮酚
六味地黄汤由宋代名医钱乙首创,是中医著名的滋补肾阴传统代表方剂,由熟地、山茱萸、山药(三补)和泽泻、丹皮、茯苓(三泻)所组成[1],主治肾阴不足证,从古到今在中医临床广为应用[2]。本实验室在前期研究中,探索性地将光合细菌引入到经典方剂六味地黄汤中,利用光合细菌自身的营养成分及其生物转化功能,达到提高药效的目的。药理实验结果表明,六味地黄汤经光合细菌代谢后,在增强免疫、抗衰老[3]和治疗肾阴虚证模型小鼠等方面的作用均优于传统的六味地黄汤[4]。本文建立测定六味地黄汤生物制剂中丹皮酚含量的RPHPLC法,为进一步有效控制其质量提供实验依据。
1 仪器与试药
仪器
Waters高效液相色谱仪; Water 2996 PDA检测器;Empower数据工作站;DL360A超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂生产);SH-2DCⅢ循环水试真空泵(巩义市英峪义予华仪器厂);BP211D电子天平(德国sartorius)。
试药
丹皮酚对照品(批号110708200505,中国药品生物制品检定所);缺丹皮六味光合液、六味光合液(实验室自制);PSB液(活菌数109个/mL,暨南大学水生生物研究所提供),甲醇(色谱纯),无水乙醇、三***甲烷(分析纯),自制双重蒸馏水。
2 方法与结果
溶液的制备
mg,精密称定,置50 mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,
0 μg/mL的对照品溶液,密封保存,备用。
样品溶液的制备取一定量六味地黄汤生物制剂的样品溶液,调pH值至2,精密量取20 mL,加入20 mL无水乙醇,超声30 min,3 000 r/min离心10 min,滤过,取上清液,即得。
阴性对照溶液的制备取不含有牡丹皮光合细菌代谢的缺味六味地黄汤样品溶液,按“”项方法制得阴性对照品溶液。
色谱条件与系统适应性试验
色谱柱为UltimateTM AQC18色谱柱( mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇水(体积比45∶55),流速为1 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长274 nm,进样量10 μL。取PSB溶液、阴性对照品溶液、对照品溶液与供试品溶液各10 μL进样,结果表明,丹皮酚色谱峰分离度良好,理论塔板数以丹皮酚计算不低于3 000,,阴性对照品无干扰,见图1。
线性关系的考察