文档介绍：HPLC法测定乙肝清热解毒片中两种黄酮类成分的含量
【摘要】目的建立以高效液相色谱(HPLC)法同时测定乙肝清热解毒片中两种黄酮类成分(槲皮素、山奈素)含量的方法。方法色谱柱为伊利特-C18柱(250mm×,5μm),流动相为乙腈—甲醇—%磷酸(10∶45∶60),检测波长为370nm,,进样量为20μl,柱温为35℃。结果槲皮素、~(r=)、~(r=);%,%,%,%。结论本法快速、简便、准确、重现性好,可用于乙肝清热解毒片的质量控制。
【关键词】乙肝清热解毒片色谱法高压液相槲皮素山奈素质量控制
乙型肝炎病毒携带者,症见黄疸(或无黄疸)、发烧(或低烧)、舌质红、舌苔厚腻、脉弦滑数、口干苦或黏臭、厌油、胃肠不适等。乙肝清热解毒片是由虎杖、茵陈、北豆根、白花蛇舌草、甘草、拳参等制成,用于肝胆湿热型急、慢性病毒性乙型肝炎初期或活动期的治疗。其中白花蛇舌草为重要组成成分,其活性成分黄酮类化合物有清热、解毒、活血、利尿的功效,可用于治疗各种癌症及炎症[1]。乙肝清热解毒片中黄酮类化合物的含量测定文献报道少见,笔者采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定乙肝清热解毒片中槲皮素、山奈素的含量,为评价乙肝清热解毒片的质量提供科学依据。
1 仪器与试药
美国Agilent HP1100系列高效液相色谱仪(包括Agilent G1310A单元泵、Agilent G1316A柱温箱、Agilent G1314A可变波长检测器);威马龙工作站;TDX高速离心机(美(Ohaus);KS1500超声清洗器(宁波科胜仪器厂)。
槲皮素、山奈素对照品(中国药品生物制品鉴定所,批号:100081-200406,l10861-200304);乙肝清热解毒片(山东海森药业有限公司,批号:20070201,20070501,20070604);乙腈、甲醇为色谱纯;水为双蒸水;其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
色谱条件
色谱柱:伊利特-C18色谱柱(250mm×,5μm);流动相:乙腈—甲醇—%磷酸(10∶45∶60);检测波长:370nm;流速:;柱温:35℃;进样量:20μl。
对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥12h的槲皮素、山奈素对照品适量,、 mg/ml的混合对照品贮备液,备用。,甲醇稀释至刻度,即得对照品溶液。
供试品溶液的制备
取乙肝清热解毒片20片,研细,精密称取粉末约5g,置烧瓶中,加入甲醇20ml和盐酸1ml,摇匀,置水浴中加热回流2h,迅速冷却到室温,滤过,滤液转移入25ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,离心,取上清液,即可。
阴性样品溶液的制备
取不含白花蛇舌草的空白片,按“”项下方法制备不含白花蛇舌草的阴性样品溶液。
专属性试验
分别取对照品溶液、供试品溶液