生物选修3和选修.doc

文档介绍：:..→拼接→导入→表达人类需要的基因产物由于基因工程是在DNA分子水平上进行操作,因此又叫做DNA重组技术。也叫基因拼结。(一)“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(简称限制酶):主要是从原核生物中分离纯化出来的。:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。:经限制酶切割产生的DN***段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。(二)“分子缝合针”——:根据酶的来源不同,可分为E·:恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。★两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:①相同点:都缝合磷酸二酯键②区别:,只能使黏性末端之间连接;T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端之间的效率较低。★DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较DNA连接酶DNA聚合酶不同点连接的DNA双链单链模板不要模板要模板连接的对象2个DN***段单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DN***段上相同点作用实质形成磷酸二酯键化学本质蛋白质(三)“分子运输车”——:①能在受体细胞中复制并稳定保存;②具有一至多个限制酶切割位点,供外源DN***段插入;③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。:质粒、λ噬菌体的衍生物和动、植物病毒等。最早应用的载体是质粒,它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。(一)获得目的基因(目的基因的获取):①从自然界中已有的物种中分离出来,如从基因文库中获取。②用人工的方法合成。★获得原核细胞的目的基因可采取直接分离,获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。(1)PCR的含义:是一项在生物体外复制特定DN***段的核酸合成技术。(2)目的:获取大量的目的基因高考资源网(3)原理:DNA双链复制(4)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链为单链;第二步:冷却到55~60℃,引物与两条单链DNA结合;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。(5)特点:指数形式扩增(6)酶:Taq酶(热稳定DNA聚合酶)(二)制备重组DNA分子(基因表达载体的构建):除了目的基因外,还必须有标记基因。★标记基因的作用:鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。:同种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接。(三)转化受体细胞(将目的基因导入受体细胞):是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。:①将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法。②将目的基因导入动物细胞