文档介绍：抗TNF-α单克隆抗体治疗豚鼠分泌性中耳炎的实验研究
【摘要】目的:观察抗TNF-α单克隆抗体对豚鼠分泌性中耳炎的治疗效果。方法:建立分泌性中耳炎的动物模型,随机分成空白对照组、造模组和TNF-αMcAb治疗组三组。比较光镜和电镜下中耳、咽鼓管粘膜的组织形态及处理组TNF-α蛋白含量变化。结果:TNF-αMcAb治疗组中耳、咽鼓管粘膜的组织形态接近于正常对照组,其TNF-α蛋白含量明显低于造模组(p<)。结论:抗TNF-α单克隆抗体能拮抗TNF-α的炎症介导作用,对豚鼠分泌性中耳炎治疗有效。
【关键词】中耳炎伴渗出液; 肿瘤坏死因子-α; 单克隆抗体; 动物模型
分泌性中耳炎(otitis media with effusion,OME)是儿童常见病、多发病,其发病机理虽有大量研究,但至今仍未充分阐明。近年来细胞因子在OME发病中的作用得到阐述与证明[1]。TNF-α作为前炎症细胞因子,引起中耳局部细胞因子网络的构建,造成耳及咽鼓管组织炎症损伤,并导致炎症迁延不愈。抗TNF-α单克隆抗体(TNF-αMcAb)通过拮抗TNF-α的炎症介导作用,已被运用于因TNF-α过量产生而导致的炎症、损伤等疾病的预防和治疗[2]。我们将TNF-αMcAb注入OME豚鼠的中耳腔,观察其对中耳、咽鼓管粘膜组织形态的影响及TNF-α蛋白表达的变化,以期获得一种新的治疗途径。
1 资料与方法
实验动物及分组:白色豚鼠由广东医学院实验动物中心提供,体重250~300g,共52只,普通级,雌雄兼用。将实验动物随机分为三组:空白对照组,4只(8耳);OME造模组,24只(24耳);TNF-αMcAb治疗组,24只(24耳)。
模型建立:豚鼠OME模型建立参照Jeon等[3]造模法,将豚鼠置于专制的豚鼠固定盒内,头颈露于盒外,耳显微钳清理外耳道,耳内窥镜检查后,75%酒精消毒外耳道,电耳镜暴露鼓膜,直视下鼓膜前下方穿刺向鼓室内注射2mg/kg铜绿假单胞菌LPS溶液(购自武汉博士德公司)50μL。TNF-αMcAb治疗组在SOM模型建立同时将TNF-αMcAb(购自武汉博士德公司)5mg注入中耳腔。豚鼠分别在造模后1、3、7、14、21、28d断头快速处死(造模组和TNF-αMcAb治疗组每次处死4只,空白对照组在28d统一处死),取大鼠双侧中耳粘膜及咽鼓管组织分成两部分,一部分30mg ,44℃1200r/min离心20min,取上清液酸化,再离心后取上清液,放置-40℃冰箱中保存待测。另一部分用10%的甲醛和25%戊二醛溶液灌注固定,制作光镜和电镜标本,光镜、扫描电镜观察。
TNF-α蛋白表达:采用放射免疫法测定TNF-α蛋白含量。按试剂盒说明书的步骤进行操作,TNF-α放射免疫试剂盒购自北京东亚免疫技术研究所,放射免疫计数器购自美国PE公司。
统计学方法:,运用成组设计t检验进行组间差异的比较。
2 结果
组织形态学检查
正常对照组:光镜下咽鼓管粘膜层薄,纤毛排列整齐。电镜下咽鼓管近鼓室段纤毛细胞的纤毛排列整齐,朝向鼻咽侧。
OME造模组:光镜下咽鼓管粘膜层增厚,腺体增生,粘