文档介绍：分光光度计
南京师范大学生命科学学院
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1、分光光度计的原理
分光光度计是根据物质对光的选择性吸收来测量微量物质浓度的仪器,具有灵敏度、准确度高,操作方便、快速等特点。其工作原理为光的吸收定律(朗伯—比尔定律):一束单色光(强度为I0)通过某吸光物质的溶液时,其光能量的被吸收与该物质浓度的关系符合朗伯—比尔定律,即当入射光波长、温度和溶液的厚度一定时,吸光度与溶液的浓度成正比。
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用公式表示为:
T = I/I0
则 A = lg(1/T) =Kbc
式中 T —透光率
I —透过光强度
I0 —入射光强度
A —吸光度
K —比例常数
b —溶液的厚度
c —溶液的浓度
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2、植物学实验室常用类型
(一)722型分光光度计
722型分光光度计能在近紫外、可见光谱区域内对样品物质作定性和定量的分析。其色散元件为衍射光栅,波长精度比721好,且数字显示读数。
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722型分光光度计
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1. 使用方法
(1)将灵敏度旋钮调整“1”档(放大倍率最小)。
(2)开启电源,指示灯亮,仪器预热20分钟,选择开关置于“T”。
(3)打开试样室盖(光门自动关闭),调节“0%T”旋钮,使数字显示为“”。
(4)将装有溶液的比色皿放置比色架中。
(5)旋动仪器波长手轮,把测试所需的波长调节至刻度线处。
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(6) 盖上样品室盖,将参比溶液比色皿置于光路,调节透过率“100%T”旋钮,使数字显示为“”(如果显示不到100%T,则可适当增加灵敏度的档数,同时应重复“3”,调整仪器的“”)
(7)将被测溶液置于光路中,数字表上直接读出被测溶液的透过率(T)值。
(8)吸光度A的测量,参照“3”“6”调整仪器的“”和“”,将选择开关置于A 旋动吸光度调零旋钮,,然后移入被测溶液,显示值即为试样的吸光度A值。(9)浓度C的测量,选择开关由A旋至C,将已标定浓度的溶液移入光路,调节浓度按钮,使得数字显示为标定值,将被测溶液移入光路,即可读出相应的浓度。
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2. 注意事项主要要注意以下几点:
(1)在接通电源之前,应该对于仪器的安全性进行检查,电源线接线应牢固,通地要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确。
(2)电表的指针必须位于零刻线上。若指针偏离,则可用电表上的校正螺丝进行调节。
(3)仪器底部放有 2 只干燥剂筒,用以保持仪器的干燥,此外在仪器停止工作期间,在比色皿暗箱内,塑料仪器套内都应放防潮硅胶袋。
(4)仪器的连续使用时间不应超过 2 h。,才能再用。
(5)务必保持比色皿透光面的清洁。不要用手摸比色皿的光滑的表面,更不要用毛刷刷洗比色皿,以免影响读数的准确。
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(6)脏的比色皿可浸泡在肥皂水中,然后再用自来水和蒸馏水冲洗干净。倒置晾干备用。
(7)每台仪器所配套的比色皿不能与其它仪器上的比色皿单个调换。
(8)如果大幅度改变测试波长时,需等数分钟后才能正常工作(因波长由长波向短波或短波向长波移动时,光能量变化急剧,光电管受光后响应较慢,需一段光响应平衡时间)。
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(二)751G 型分光光度计
可测定各种物质在紫外区可见光和近红外区的吸收光谱,供实验室进行各种物质的定性及定量的分析。
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