文档介绍：*知识回顾:基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定有了目的基因,我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的基因在受体细胞中稳定存在,并可进行遗传、表达和发挥作用载体进入受体细胞稳定表达,才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。*一、目的基因的获取1目的基因主要是编码蛋白质的基因:如:与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因、具调控作用的因子等。2获取目的基因的常用方法:1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成*原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①不编码蛋白质。:编码蛋白质,连续不间断编码区非编码区②调控遗传信息表达,上游有RNA聚合酶结合位点:基因结构*真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区内含子外显子启动子终止子编码区上游编码区下游编码区非编码区外显子:能编码蛋白质的序列内含子:不能编码蛋白质的序列:有调控作用,上游有RNA聚合酶结合位点(启动子)。与RNA聚合酶结合位点基因结构*:将含有某种生物不同基因的许多DNA片断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。:基因组文库:含有一种生物的全部基因部分基因文库:只包含了一种生物的部分基因,如:cDNA文库*基因组DNA文库与cDNA文库某生物体内全部DNA许多DNA片段受体菌群体限制酶与运载体连接导入基因组文库cDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入cDNA文库某种生物某个时期的mRNA*真核细胞的cDNA的获取编码区非编码区非编码区DNA聚合酶剪接有关的酶RNA聚合酶mRNA前体mRNA单链DNAcDNA逆转录酶转录剪接逆转录复制启动子终止子基因不含非编码序列。即不含非编码区和内含子*基因组DNA文库与cDNA文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子(具有启动作用的DNA片段)基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段)基因多少物种间的基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以*③怎样从基因文库中找到我们所需要的目的基因根据目的基因的有关信息,例如,根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。*