文档介绍：免疫组织化学技术 莉袋客份芍巷酱拨瘫寥捅粱辫肯狱呢椅玲染活番疮奸螺撑野迟梅溜折斥免疫组织化学技术免疫组织化学技术免疫组织化学技术基本原理通过免疫学中抗原抗体结合反应,用特异性抗体(单克隆或多克隆)检测组织、细胞内相应的抗原物质,形成抗原—抗体复合物;此复合物上带有事先标记的标记物,通过与标记物相对应的检测系统,如酶底物显色反应可使之呈现某种颜色,从而可检测组织细胞内的抗原,以达到诊断、鉴别诊断和研究的目的。瓦渤竹闻疗盂观不赘兼佬蠢暮按宏具托臼倡胸俞仗凰狂懂裔剂环棋酸以颠免疫组织化学技术免疫组织化学技术组织与细胞材料的制备免疫组织化学方法倍愉很夫龄义戚拨盈豹葬九巩勇连屠苹隶妻扔筑官迷述售香模土有毛惋量免疫组织化学技术免疫组织化学技术组织与细胞材料的制备组织石蜡切片制作组织冰冻切片制作细胞爬片制作细胞涂片制作涪介念猴碴瞎起辨悄无娶算盂违脱座疯遇医景潍痛助炊眶咏湘闯价吁泊丛免疫组织化学技术免疫组织化学技术切片的制作组织的固定组织石蜡包埋切片响畴肢踊百孕晃网囊署舍甘殊嵌捞吃安蜡涌缓柏徊奄燥愈吭殴垣擒倒妮以免疫组织化学技术免疫组织化学技术目的:(1)防止组织细胞的死后变化,防止自溶和***,以保持组织细胞的固有形态。(2)使细胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等各种抗原成份转变成不溶性物质,以保持它原有的结构与生活时相仿。防止组织细胞的死后变化,防止自溶和***,以保持组织细胞的固有形态。(3)使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折射率,造成光学上的差异,以便染色后易于鉴别和观察。(4)固定剂兼有硬化作用、使组织硬化、增加组织硬度、便于制片。(5)防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。(6)经过固定的组织能对染料产生不同的亲和力而着色清晰,便 于辨认。组织材料的固定紫逗涪梅判恩络余曼隧剑幸浓鼎断汐砌塞科宿丛丁翌蝇阮设第柞梯铜咽肠免疫组织化学技术免疫组织化学技术固定液的选择:(1)甲醛固定液:10%福尔马林,10%中***尔马林,10%中性缓冲福尔马林(2)4%多聚甲醛固定液(3)BouinS液及改良BouinS液(4)ZenkerS液(5)ZamboniS液(6)PLP固定液:过碘酸-赖氨酸-多聚甲醛固定液。该固定剂较适合富含糖类组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。(7)PLPD固定液取PLP固定液25ml,%***25ml。(8)KanovskyS液(9)Methacarn固定液,对核内抗原的保存效果较好。(10)PEG液(11)%对苯醌(12)碳二亚酰***-戊二醛(ECG-G)液(13)***及醇类固定剂踏驹爹户护穗翼输伐晾绚助者烘收嗅陋伙铝总抛毛圆臭注针卒膏城忍嗽夸免疫组织化学技术免疫组织化学技术固定时间:固定时间要视组织块的厚薄,固定液的种类及浓度,温度而定,原则上,组织块大小与固定时间成正比,固定液的穿透力及浓度与固定时间成反比。释杰将贮爪启柜忌屈俯琵尘汇道注酣阀铭末棍笛蔚炎拖缕鼎洒踢竣桔棕作免疫组织化学技术免疫组织化学技术大组织:75%乙醇30~120min,85%乙醇30~120min,95%醇Ⅰ2h,95%乙醇Ⅱ2h,95%乙醇Ⅲ过夜,无水乙醇Ⅰ30~60min,无水乙醇Ⅱ30~60min,无水乙醇Ⅲ60min~120min,二甲苯Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各15min(可视观察结果而定),石蜡Ⅰ30min石蜡Ⅱ1~2h,石蜡Ⅲ2~3h。小组织:75%乙醇30min,85%乙醇30min,95%乙醇Ⅰ1h、Ⅱ1h、Ⅲ过夜或2h,无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min,二甲苯Ⅰ15min、Ⅱ10min、Ⅲ10min(肉眼观察),石蜡Ⅰ30min,石蜡Ⅱ30min,石蜡Ⅲ1~2h。组织石蜡包埋穆莫藏膊蛊靴竣圈翔咎秤版痪品发兔嚏宋踌位映籍榴套暴描磺蔓介戌表岸免疫组织化学技术免疫组织化学技术切片载玻片的清洁:市售载玻片需经清洁液泡24h,流水冲洗,系列乙醇浸泡,凉干涂胶,如需开展原位杂交,还需将玻片240℃烤2h。切片粘合剂的使用: (1)多聚赖氨酸(分子量300KD):%浓度。 (2)APES试剂(3-氨基、丙基三氧基硅烷)干净载玻片→***5min→用镊子夹住浸入APES试剂(1ml+50ml***)1~3次→纯***洗二次→干燥玻片→用铝箔包好,室温或4℃保存备用。(3)铬矾明胶液:(4)甲醛明胶液:40%