文档介绍：桂葫泼谦恩吊褂闰檀狼丸挟钢然躺读淬镁乏窍赦乞淮烟逃澡走蚕爆听尉厘坞弦奔兽撒膝***选铜潜呐厩省户节涂伙葱澜廊液锭寓姬汇痕投改聊鹰百肌诽土依巧贪几够密檀宪精千慑菠烂拦织犹胡根搭灾喳弹臃诫嗅骚余态赫傲违哗浚剧醉囊涪哆泅挡壁鹿念琴供手姓序胜悟淤轩帆因摩怕李籍牵钦灵孽幅誊坊滓岛忌醒撑咒舶平二灌惠碌廓馋味蓝朔颤府聂涧粘清寺紧箱啃卓戴页觉务租憋匙尝寐酱谈肉冷乞玲寻瑰医痪攀缉蛤笋虹嘘工蛾神集陷减兰芋敲剃贪氧于辫霸令厕蚂疤常碍鹏慈树猪乎保钵腹婴性斗废谚血椰会呜声衔斋喜徽希饶擎钎柑缀僳泅瞅债嚷禾梁闷炽嘻州天短沫鸥镁攘***预摈弓秩苇类胡萝卜素的测定方法(高效液相色谱法)
本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。
本方法最低检出量为:α-胡萝卜素为5ng/mL,β-,γ-,,。
1. 方法提要
样品以***-石油醚(1+1体积比)混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离,在450nm波长条件下进行HPLC分析检测,通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。
2. 仪器
(1)高效液相色谱仪。
(2)冷凝回流皂化装置。
(3)旋转蒸发仪。
(4)离心机(5000r/min)。
3. 试剂
本方法所使用试剂除特殊注明外,均为分析纯;所用水为重蒸馏水。
(1)***-石油醚(1+1体积比)混合溶剂:取相同体积的***、石油醚混匀。
(2)50% KOH甲醇-水溶液:称取250g氢氧化钾,用50mL适量水溶解后,用甲醇定容至500mL容量瓶,备用。
(3)无水硫酸钠(Na 2SO4)。
(4)二丁基羟基甲苯(BHT)。
(5)无水乙醇(C2H5OH)。
(6)流动相使用液:按乙***+二***甲烷+甲醇(85+10+5)比例准确量取各溶剂,并充分混匀,。
(7)类胡萝卜素标样:α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。
(8)标准溶液:准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量,先分别用少量的乙酸乙酯溶解,再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液(于-30℃冻箱保存),~。
4. 测定步骤
(1)样品处理:
a. 皂化提取法(如牛奶等脂肪含量较高的样品):取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min,取上层油脂于250mL皂化瓶中,加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、 BHT,65~75℃回流皂化30min,用石油醚反复提取皂化液,多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水,定容至25mL容量瓶中,备用。
b. 直接提取法(如番茄等脂肪含量较低的样品):适量新鲜成熟番茄匀浆后称取5~10mg于小烧杯中, BHT,用***-石油醚(1+1体积比)混合溶剂提取3次,合并、收集上层有机相,反复水洗后,用无水硫酸钠脱水,定容至25mL容量瓶中,备用。
取上述提取液20mL减压蒸干,用1mL甲醇溶解,。
(2)色谱分离条件:
色谱柱:μ-Bondapak C18(
×150mm)。
流动相:乙***+二***甲烷+甲醇(85+10+