文档介绍：乙肝病毒核酸检测实验操作流程主要内容HBV-DNA的检测原理HBV-DNA操作流程HBV-DNA检测结果分析临床意义DNA提取PCR扩增标本采集检测原理HBV:用一对乙型肝炎病毒特性引物(Primer)和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针,配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶(Taq酶)、四种脱氧核苷酸单体(dNTPs)等成分,用PCR体外扩增法定量检测乙型肝炎病毒DNA原理图每产生一条DNA链,就切断一条探针每切断一条探针,就产生一个荧光信号信号强度与结合探针的DNA分子数成正比操作流程一、标本采集一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升,注入无菌的干燥玻璃管室温(22~25ºC)放置30~60分钟血标本使用水平离心机,4000转/分离心5分钟吸取上层血清,,注入含EDTA或枸橼酸钠抗凝剂的试管立即轻轻颠倒玻璃管混合5~10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀5~10分钟后即可分离出血浆,,有纤维蛋白的标本应离心去除脂类浑浊标本拒收(离心4000rpm,5min)血清血清不能使用肝素抗凝因为对PCR扩增有抑制作用,-DNA的提取打开HBV-DNA试剂盒↓↓取出DNA浓缩液、DNA提取液(置室温融解,充分混匀)↓↓↓↓加入DNA浓缩液和待测样本各100ul(振荡混匀)↓↓12000rpm,离心10min↓↓去上清,沉淀中加入20ulDNA提取液(振荡混匀)(阴、阳性质控品处理方法:各取50ul,分别加入DNA提取液各50ul)↓↓100℃恒温干浴10min↓↓。。离心后应沿着沉淀存在的对侧缓缓吸去上清,枪头贴管壁顺着液面下移,防止带走不可见的沉淀物。如沉淀不明显可以保留少量液体,建议将移液器量程调至190ul一次性吸取。