文档介绍：-甘露聚糖酶的分离提取及纯化鉴定3赵娜,王和平,蔺日胜,任旭荣,杨逸隆()内蒙古农业大学生物工程学院,呼和浩特010018β摘要:从蜗牛肝脏组织制备粗酶液后,经硫酸铵分级分离和两次聚丙烯酰胺凝胶制备电泳,纯化到了蜗牛肝脏-β甘露聚糖酶。该酶经SDS-PAGE电泳分析显示为单一条带,其表观相对分子量为37KD。本法纯化的蜗牛肝脏-甘露聚糖酶,,,%。β关键词:蜗牛;-甘露聚糖酶;制备电泳():1009-3575200804-0141-06中图分类号:文献标识码:ATHEISOLATION,ABSTRACTION,PRIFICATIONANDβIDENTIFICATIONOF-MANNANASEFROMSNAILLIVER3RENXu-rong,YANGYi-longZHAONa,WANGHe-ping,LIN-Ri-sheng,()CollegeofBioengineering,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Huhhot010018,China()Abstract:Extractinghealthylivertissuefromsnails,preparingofroughenzymeliquid,andispurifiedbytwiceNH42SO4precip2itationandtwicePAGEpurification,gettingpurified?-,,%。βKeywords:Snail;-Mannanase;preparativeelectrophoresis[10](ββ酶基因并实现了表达;ShuujiOotsuka等人从鲍鱼-甘露聚糖酶-1,4-mannanase;.),并具有纤维素酶消化腺克隆到该基因并实现表达;瑞典乌普萨拉大[11]β活性。该酶以内切方式降解粗纤维中的-1,4糖学生物医学实验中心的华人许秉泽作了一系列苷键,降解产物的非还原端为甘露糖残基,其作用底β工作,包括软体动物紫贻贝消化腺-甘露聚糖酶β物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及-甘露聚的纯化,酶学性质的研究,该基因也被克隆并在毕糖等,其水解产物为单糖和二糖、三糖、四糖等低聚β赤酵母中得到表达。可见人们已关注到动物来源[1-3]糖。β-甘露聚糖酶基因的应用价值。而采用蜗牛作为β-甘露聚糖酶广泛存在于自然界中,许多发芽-甘露聚糖酶基因的来源主要因为:蜗牛消化道中β的植物种子以及番茄果实和种子中都有-甘露聚β的原始-甘露聚糖酶酶活非常高,而且蜗牛来源[4-7]()糖酶活性。微生物如细菌、真菌和放线菌等β广,对人体及动物没有危害,软体动物具有内源-β则是-甘露聚糖酶的主要来源,其中研究较多的β甘露聚糖酶基因已经得到证实。但蜗牛-甘露聚是细菌中的枯草杆菌、真菌中的曲霉菌、里氏木霉菌糖酶及其基因序列未见报道,因此本研究以白玉蜗[8]以及放线菌中的链霉菌等。β牛为对象,从蜗牛肝脏提取、分离、纯化-甘露聚近年来,国外研究者对存在于软体动物体内的糖酶,鉴于酶联免疫反应的特点以及本实验的实际[9]β-甘露聚糖酶基因也进行了研究。Yamaura等人情况,我们采取了酶联免疫反应中灵敏度和准确性β最高的双抗体夹心法来检测提取产物,甫于从里氏从1种光滑扁卷螺消化腺中克隆到了-甘露聚糖3收稿日期:2008-09-26()基金项目:国家自然科学基金39870558()作者简介:赵娜1982-,女,硕士研究生,:E-mail:whp53whp@β两次离心上清液备用。木霉RutC-30中分离提取的-甘露聚糖酶与从ββ3,5本研究采用蜗牛肝脏组织中提取的--甘露聚糖酶酶活测定()β性及理化性质上十分形似,因此我们用来源于里氏-二硝基水杨酸DNS法测定-甘露聚糖酶活β木霉RutC-30的抗-甘露聚糖酶单克隆抗体及()β性。当底物槐豆胶遇到-甘露聚糖酶时,可被β多抗来检测蜗牛肝脏组织中的-甘露聚糖酶。这酶分解出还原糖,此时与DNS共热,可有棕红色物ββ为今后蜗牛-甘露聚糖酶序列测定