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卷期胡勇等抗犬瘟热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
价。分别复苏冻存、、和个月的阳性杂交瘤细胞,用细胞株冻存、、和个月后复苏,其诱生腹水的单抗效
间接法测定细胞培养上清及细胞诱生小鼠腹水的抗价仍保持在~ ~。
体效价。.. 杂交瘤细胞染色体。对株杂交瘤细胞分裂相染色
.. 杂交瘤细胞染色体分析。取对数生长期的杂交瘤细体形态进行观察,均可见到端着丝点和中间着丝点,染色体
胞,经秋水仙碱./溶液处理,固定制片后染色, 数目介于~条,具有杂交瘤细胞染色体特征。
油镜下观察染色体并记数。.. 单抗特异性。筛选的株杂交瘤细胞株与犬传染性
.. 单克隆抗体的生产及效价的测定。对获得的杂交瘤肝炎病毒,和犬细小病毒的反应均为阴性,与
细胞扩大培养,收集上清液,间接测定效价,冻存。同阳性对照反应正常,说明不存在交叉反应,株单克隆
时,用灭菌的液体石蜡油腹腔注射周龄健康/小抗体都是针对的特异性单克隆抗体。
鼠,./只,~后每只小鼠腹腔注射杂交瘤细胞~ .. 单抗亚型。在试纸条的、区各出现条清晰的条
个,待其腹部隆起时,用针头抽取腹水,/离带,说明株单克隆抗体均为、型。
心,取上清,间接检测抗体的效价,冻存。讨论
.. 单抗特异性鉴定。分别以犬传染性肝炎病毒的制备有赖于细胞杂交瘤技术,其周期长,涉及
和犬细小病毒为抗原包被聚苯乙烯微量滴定板,同时的试验环节很多,受很多因素的影响。在诸多的影响因素
设为阳性对照,间接检测各株单抗反应的特中,抗原制备、动物免疫及免疫方法等是能否获得杂交瘤细
异性。胞和高效价特异性单克隆抗体的重要因素。通过对病毒培
.. 单抗的亚型鉴定。按试剂盒操作手册进行。养液进行反复冻融、硫酸铵沉淀和蔗糖密度梯度离心进行纯
结果与分析化,并用纯化的抗原免疫/小鼠,提高了杂交瘤细胞的
. 抗犬瘟热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立阳性率。但在进行间接阳性克隆筛选时,这样的抗原
..的分离纯化。经硫酸铵盐析、蔗糖密度梯度离还是会产生假阳性结果,因此,在筛选时,设置未接种病毒的
心并透析,紫外分光光度法测得病毒蛋白浓度为.“。细胞抗原为对照,最大限度地去除了假阳性结果。
.. 最佳抗原包被浓度。根据方阵试验结果,最佳抗原研究共获得株能稳定分泌抗单克隆抗体的阳性
包被浓度为./;最佳阳性、阴性血清稀释度为: 杂交瘤细胞株。这株单克隆抗体均为类,将有利于标
。记二抗的选择及建立相应的免疫检测方法。检测结果
.. 细胞融合及筛选结果。共用块孔细胞板融合筛还证实,株单克隆抗体均有较高的特异性,与犬传染性肝
选,有孔有融合细胞生长,融合率为%/,其中炎、犬细小病毒均无交叉反应。因此,可以为实验室研制
孑抗体阳性,阳性率为%/。选择其中值较快速检测试剂盒提供基础。但由于暂没有得到更多的
高的阳性克隆进行亚克隆,