文档介绍：南昌博恒生物制品有限公司 恒®玉米赤霉烯*** ELISA 快速检测试剂盒操作说明书1  简介本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附 ELISA 原理快速定量检测谷物、饲料中的玉米赤霉烯***(ZearaLenone,ZEN)。谷物/饲料的前处理包括:提取、过滤、稀释,处理时间大约为 20-40 分钟。本试剂盒的检测限为:10 ppb;谷物/饲料中 ZEN 的回收率 ≥80%;批内、批间变异系数<15% 。2  试剂盒组成A. 24/48/96 孔 ZEN 酶标板: 3/6/12 条×8 孔B. 20×浓缩洗涤液:25mL (用蒸馏水稀释 20 倍使用) 1 瓶C. ZEN 抗体: 3/6/12mL 1 瓶 (红盖)D. 酶标二抗: 3/6/12 mL   1 瓶 (绿盖)E. 显色液:3/6/12 mL 1 瓶 (蓝盖)F. 终止液:3/6 mL 1 瓶 (黄盖)G. ZEN 标准品:(0、30、60、200、500ppb) 各 1 瓶H. 操作说明书 1 份注意:标准品含有低浓度 ZEN、终止液含 2 N H2SO4,需小心取用;勿在有效期外使用本试剂盒。3  贮存条件与有效期2-8℃避光贮存,忌 0℃以下冻存,有效期见试剂盒内盖。4  样品处理程序l 实验准备:配制 60%甲醇水溶液(v/v,60:40)和 20%甲醇水溶液(v/v,20:80)。注意:请精确配制上述溶液,以免影响检测的准确性。l 称取 5 g 具有代表性的粉碎样品于 100 mL 带塞三角瓶内,准确加入 25 mL 60%甲醇水溶液。l 将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内(或用手强力振荡),充分振荡 3 分钟后,用whatman 1 号滤纸过滤,收集滤液。l 取滤液 2mL,加入 6 mL 20%甲醇水溶液,混匀,用 whatman 1 号滤纸过滤,此为样品待检液。 Bohom Bio-product Co., Ltd, Nanchang, China123…12A空白样品B标准品①样品C标准品②样品D标准品③样品E标准品④样品F标准品⑤样品G样品样品H样品样品注意:Ø 某些样品待检液(如花生等)久置影响检测结果的准确性,为保证检测的准确性,样品提取后请即时检测。Ø 若样品待检液不立即检测,请将其存储于棕色玻璃瓶内,2-8℃避光保存。Ø 试剂盒在使用前,请将试剂盒内所有试剂放到室温(20-25℃)进行温度平衡。试剂用完后立即将其放置回 2-8℃冰箱内保存。Ø 在每个步骤操作时,速度要快,不要使板孔暴露在空气中时间过久,避免酶标板变干。未用完的酶标板需密闭于自封带内,防止受潮且避光保存于 2-8℃冰箱内。Ø 在温育时,避免光照,建议将酶标板置于湿盒内(在有盖容器内放置一块平整湿纱布)进行温育。Ø 若样品数量超过 20 份,请用多通道加样器操作。5   实验准备:从冰箱取出试剂盒,恢复至室温后,打开自封袋,取出所需数量的板条插入微孔架,记录空白、ZEN 标准品①②③④⑤号及样品的位置(可参照下表所示)。其余板条封口后放入冰箱。将 20×浓缩洗涤液用超纯水或蒸馏水稀释 20 倍,待用。 加样:空白孔加入 100 µL 洗涤液(不加 ZEN 抗体)。ZEN 标准品孔和样品孔相应地加入标准品(①②③④⑤)和样品待检液各 50 µL/孔(如上表所示加入),再