文档介绍：一、原理使用一对沙眼衣原体特异性引物和一条沙眼衣原体特异性荧光探针,配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶(Taq酶)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分,用PCR体外扩增法检测沙眼衣原体DNA。二、标本的采集和处理::::用男性专用棉拭子取尿道分泌物或伸入尿道约2~4cm,略捻拭子取出分泌物(略带粘膜),拭子取出后放入塑料试管密闭送检。:***-用无菌生理盐水洗去宫颈外分泌物,再用女性专用棉拭子插入宫颈内,停留5秒后旋动棉拭子采取宫颈分泌物,密闭送检。-棉球蘸取无菌生理盐水洗净尿道口,再用女性专用棉拭子插入尿道约2cm,略捻拭子取出分泌物(应略带粘膜),密闭送检。:门诊病人标本由患者本人送检,住院病人标本由专门工作人员运送。标本可立即用于测试,1~5℃保存不超过3天,也可保存于-20℃待测,保存期6个月。三、。:组分名称规格数量PCR反应管1人份/管20DNA提取液500μl/管2阴性质控品250μl/管1CT临界阳性质控品50μl/管1CT强阳性质控品50μl/管1CT阳性定量参考品(×104~×107IU/ml)10μl/管4   :于-20℃保存,避免反复冻融。试验前室温平衡30min。四、仪器:高速低温离心机,生物安全柜,恒温金属浴,。五、操作步骤:(一)核酸提取:1标本处理: 标本试管中加入1ml无菌生理***化钠溶液,充分震荡混匀;,12,000rpm离心5min;,沉淀加无菌生理***化钠溶液1ml,漩涡振荡器混匀,12,000rpm离心5min;,沉淀中加入50μlDNA提取液充分混匀,100℃恒温干浴10min(误差不超过1min),00rpm离心5min,备用。,,加入50μlDNA提取液,振荡器混匀5~10秒,1OO℃干浴10min(误差不超过1min),000rpm离心5min,备用。(在二区进行)3CT临界阳性质控品的处理(同阴性质控品)4CT强阳性质控品的处理(同阴性质控品)(二)PCR扩增:1加样:取PCR反应管,分别加入待测标本及阴阳性临界值质控品2μl,盖好离心管盖,6500rpm离心数秒,使试剂与标本混合。(在二区进行)2PCR扩增:,放入仪器中按照该仪器操作程序进行PCR扩增()。(在第三区进行)六、结果分析::反应结束后自动保存检测数据文件,调整荧光数值(Fluores