文档介绍：姓名:郭沈杰年级专业:2012级生物科学同组者:蔡萍萍学号:实验七酵母RNA的提取及鉴定一、实验目的掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。二、实验原理酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。用碱液提取的RNA有不同程度的降解。三、实验仪器1、离心机2、水浴锅3、电炉4、烧杯5、量筒6、移液管7、玻璃棒8、滤纸9、漏斗10、试剂瓶11、电子天平12、pH试纸(pH1~14)四、实验试剂1、干酵母粉2、%氢氧化钠溶液:2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。3、乙酸(.)4、95%乙醇无水***(.)6、10%硫酸:浓硫酸()10ml,缓缓倾于水中,稀释至100ml。7、氨水(.)8、5%***银溶液:5g***银溶于蒸馏水并稀释至100ml,贮于棕色瓶中。五、实验步骤(一)RNA的提取:1、称取2g干酵母粉于100ml烧杯中,%氢氧化钠溶液10ml,沸水浴加热30分钟,经常搅拌(如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~8ml氢氧化钠)。冷却,然后加入乙酸数滴,使提取液呈酸性(pH试纸检验,pH5~6),离心10-15分钟()。倒取上清液,加入2倍体积的95%乙醇,边加边搅,加毕,静置,待完全沉淀,过滤。2、滤渣先用95%乙醇洗2次,每次约5毫升,再用无水***洗2次,每次也约5ml。3、洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。***滤干后,滤渣即为粗RNA,可鉴定和测定含量用。(二)鉴定:1、,加10%硫酸5ml,加热至沸1~2分钟,将RNA水解。2、水解液2ml,加入氨水2ml和5%***银溶液1ml,观察是否产生絮状嘌呤银化合物。注意事项:1、离心管回收2、离心的时候,要两两对称放置,且离心管中溶液的量基本一样。否则会遭成离心机转子的损坏。六、实验结果(一)RNA的提取:加入乙酸使溶液呈酸性,溶液呈土黄色。进行离心后,沉淀沉于离心管的下部,上半部分上清液呈土黄色。取上清液,加入2倍体积的95%乙醇后,溶液呈现白色浑浊状完全浑浊后,上清液呈白色,沉淀为白色。过滤洗涤后,得RNA粗品。(二)鉴定:(1)水解后,溶液呈无色透明状。加入氨水后,溶液仍澄清,溶液中似有油状物质产生。加入***银后,仍似有油状物质产生。一段时间后,产生白色絮状沉淀。(2),加苔黑酚—三***化铁试剂1ml,加热至沸1min,观察颜色变化七、实验分析称取干酵母粉::(%)=RNA质量(g)/干酵母粉质量(g)x100%本实验中RNA提取率(%)==%(稀碱法提取的RNA为变性RNA)本实验为定性实验,提取酵母中的RNA中,产