文档介绍：功能微生物的筛选、培养与选育生科院09012**********年11月30日概要:以产抗生素细菌的筛选和选育为目标,通过培养基制备及灭菌、菌种的分离纯化、菌种的鉴定、培养条件的优化以及诱变育`种五个实验,:分离纯化、灭菌、酶活性、诱变一、材料与方法:(g/L):牛肉膏3,蛋白胨10,NaCl5,琼脂20,~。注:配制3000mL,分装20支固体斜面试管(不超过试管高度的1/3)和20支液体试管(不超过试管高度的1/3),其余分装于1L三角瓶,每瓶500mL。不同pH值配制1(g/L):牛肉膏3,蛋白胨10,NaCl5  配制2(g/L):牛肉膏3,蛋白胨10,NaCl5 :淀粉3g,蛋白胨10g,,MgSO4·,:葡萄糖3g,蛋白胨10g,,MgSO4·,:***钠10g,葡萄糖3g,,MgSO4·,:蛋白胨10g,葡萄糖3g,,MgSO4·,,放入8~10颗玻璃小珠,加盖瓶塞,包扎待灭菌;50ml三角瓶内盛入18-20ml蒸馏水,加盖瓶塞,包扎待灭菌;:7支试管为一包扎单位,用报纸将试管塞部分包扎严实并绳之以纱线;:用报纸将瓶塞部分包扎严密,并以纱线系之;:6个平皿为一包扎单位,用报纸以滚筒方式将其包紧;:每1支吸管为包扎单位,:6个离心管为包扎单位,用报纸包成小包。固体斜面的摆放注:斜面长度不超过试管长度的1/,注意不要让培养基倾斜以防溢出,然后再放入其它的玻璃器材。灭菌物品之间不要摆放太挤,以保证高压蒸汽灭菌能够彻底。,天气晴朗,用取样铲,将表层5cm左右的浮土除去,取5~25cm处的土样10~25g,装入事先准备好的灭菌信封内。:称取土壤2g,放入18mL带有玻璃珠的无菌水三角瓶中,振荡5min,即为稀释10-1的土壤悬液,土壤悬液80℃水浴加热10分钟,然后在离心管中依次稀释至10-2、10-3等稀释度。:倒入融化好的淀粉琼脂培养基(温度为不烫手为宜)并轻轻摇晃混匀,置于桌面冷却为平板。在无菌培养皿底部注明个人信息(分离菌名、稀释度、组别、班级)。-1、10-2、10-,分别加在已制好的3块淀粉平板培养基上。b涂板用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平,倒置于恒温箱培养。℃培养24小时。。a、48小时后,在之前稀释涂布的三块淀粉培养基上选取典型的单个菌落,并用记号笔在平板背面进行编号。然后将编号后的菌落用无菌牙签挑取,在备用的淀粉培养基平板上分别划线接种(编号与被挑菌落相同)b、将碘液滴加在之前稀释涂布的三块淀粉培养基上,观察是否有水解圈的产生,并测量其半径。c、根据水解圈的有无以及大小判定有关菌落是否产生淀粉酶,并记录该菌落编号,并将接种有分离平板上菌落的备用淀粉琼脂平板冰箱保存留作后续实验之用。,并接种一支斜面试管保藏。%接种量分别转接如下五种液体摇瓶发酵培养基:1 牛肉膏蛋白胨培养基      30℃培养2 牛肉膏蛋白胨培养基      18℃培养3 牛肉膏 柠檬酸钠培养基    30℃培养4 牛肉膏 ***钠培养基     30℃培养5 牛肉膏蛋白胨培养基pH4    30℃。培养基倒入量要求不要太多,尽量薄一点,铺满平板底部即可。b用小滤纸片分别蘸取各瓶18小时培养物少许,要求不要蘸太多,保证每片所蘸培养物尽量一致c如右图所示,将小滤纸片贴在淀粉培养基表面,并分别在底板上做上标记d将平板置于30℃培养箱作用1h。然后将碘液铺在平板上,,在721型